Результаты экспериментальной работы и их обсуждение.

В процессе данной работы на искусственно созданные рубцы кожи крыс, после операции дермабразии, пересаживались кератиноциты в разных формах - на раневых покрытиях, в виде суспензии на батисте и многослойным пластом без подложки.

Было обнаружено, что все три способа пересадки реальны, однако пересадка МПАК без подложки - очень трудоемкая процедура, в процессе которой МПАК может быть травмирован, что отражается на результатах пересадки. Более того, данный способ пересадки исключает работу на больших поверхностях.

Пересадка суспензии кератиноцитов - способ значительно более экономичный, не требует длителоьного культивирования клеток и прост в предлагаемом нами варианте с использованием стерильных батистовых заготовок, размеры которых соответствуют величине рубцов. Отставание лечебного эффекта при пересадке суспензии клеток приблизительно на месяц по сравнению с МПК на раневом покрытии - не существенный момент при длительности лечения, исчисляемой многими месяцами. Известно, что при пересадке МПК ожоговым пациентам, трансформация состояния структуры кожи происходила постепенно и в течение нескольких лет (2.54,66,98). Пересадка культуры кератиноцитов на раневых покрытиях - самый удобный и перспективный метод, однако и значительно более дорогостоящий. К тому же, требующий на сегодняшний день поиска более совершенных вариантов покрытий, которые должны быть пластичными, гигроскопичными, обладать бактериостатическими или бактерицидными свойствами и быть биологически нейтральны для клеток. Пленка «Полипор» - промежуточный вариант отечественного пленочного раневого покрытия, несмотря на некоторое несовершенство, позволила нам изучить в эксперименте пересадку кератиноцитов крыс на рубцы и сделать выводы об эффективности данного направления влечении рубцов.

Авторы, производившие пересадку МПК на раны обожженных, отмечали, что в течение первой недели после трансплантации многослойного пласта кератиноцитов на санированные раны, эпидермис утолщался и страти­фицировался. Все слои эпидермиса были хорошо выражены. Интересно, что количество клеточных слоев в трансплантантах на 10-30% больше, чем в биоптатах кожи. Авторы отмечали появление гранул кератогиалина на 5-е с>тки по­сле пересадки МПК, базальной мембраны и полудесмосом-уже на 3-й сутки (2,54,66).

J.Rives et а!.,(1994), Парамонов Б.А.(1996); Кузнецов Н.М и др. (1998), установили, что в ранние сроки после трансплантации МПК пациентам с полнослойными дефектами кожи после ожогов, связь между дермой и эпидермисом очень слабая и представляет собой прямую линию, сосочковый слой отсутствует. К исходу 2-го месяца начинается формирование неглубоких сосочков и придатков кожи, связь дермы и эпидермиса становится более прочной (27,54,131,153). Данные литературы говорято пересадке аллогенных кератиноцитов на раны обожженным пациентам, как о перспективном методе. Несмотря на то, что отторжение аллогенных кератиноцитов происходит поданным разных авторов в сроки от 10 дней до 3-х месяцев, тем не менее они выполняют свою роль в заживлении раневой поверхности, выделяя факторы роста (17,74,152) и механически закрывая дефект. Считают, что МПАлК обладают сниженной антигенной активностью, так как при культивировании in vitro теряют клетки Лангерганса, что позволяет им длительное время существовать в организме реципиента. Кроме того, аллагенная культура, полученная из кожи молодых здоровых людей обладает несравненно большим биологическим потенциалом, чем аутологичная культура пациентов после травмы (111,113,139).

Основной целью нашего исследования было выяснить будут ли приживаться аллогенные кератиноциты на рубцы и каковы будут изменения в рубцовой ткани под влиянием такого биологически активного «раневого покрытия». В случае положительного результата, отработать максимально эффективную и наименее трудоемкую технологию данного направления реабилитационной медицины.

Полученные нами данные во многом оказались сходными с данными литературы о морфологических изменениях, происходящих в эпидермисе человека после пересадки аллогенных кератиноцитов на ожоговые раны. Но есть и существенные отличия, как в плане морфологического субстрата, на который происходит трансплантация, так и в плане технологии. Так, процесс образования базальной мембраны и дермо-эпидермальных связей (полудесмосом, сосочков) происходит в более поздние сроки по сравнению с пересадкой кератиноцитов на раневые поверхности без рубцовых изменений. По видимому, это происходит за счет более плохого питания тканей рубца по сравнению с дермой или фасциями мышц. Рубец, особенно старый -это плотная соединительная ткань с очень незначительным количеством сосудов, дно ожоговой раны представляет собой грануляционную ткань, богатую сосудами. Таким образом, очевидно, что условия, в которых происходит трансплантация и приживление кератиноцитов абсолютно различные. Чем более васкуляризирована область пересадки клеток, тем легче идет процесс их приживления. Из этого постулата вытекает вывод о предпочтительности работы с молодыми рубцами, в которых соединительная ткань еще достаточно рыхлая и богата сосудами.

В результате этой экспериментальной работы мы доказали, что:

1. Пересадка МПАлК на рубцы возможна.

2. Оптимальным способом пересадки является пересадка кератиноцитов на раневом покрытии.

3. Поверхность рубца должна быть отшлифована с помощью оперативной дермабразии лазером или фрезой Шумана.

4. Под влиянием МПАлК происходит быстрая эпител изация отшлифованной поверхности рубца.

5. Чем лучше васкуляризирована ткань рубца, то есть чем моложе рубец, тем лучше результаты трансплантации кератиноцитов.

6. Ткань рубца под влиянием пересаженных кератиноцитов постепенно трансформируется и превращается в дермоподобную (более рыхлую рубцовую ткань с придатками кожи).

7. Постепенное разрыхление рубцовой ткани, начинается с субэпидермального слоя. Улучшается ее васкуляризация, пучки коллагеновых волокон в верхней и нижней частях рубца принимают более рыхлое расположение, чем в рубцовой ткани без трансплантации клеток.

8. Наблюдаемые нами изменения связаны с выделяемыми кератиноцитами факторами роста, цитокинами, которые улучшая трофику рубцовой ткани способствуют ее трансформации из грубой фиброзной ткани в более рыхлую, что и приводит к улучшению вида рубца.

Таким образом, на основании данного исследования можно сделать вывод о благоприятном влиянии трансплантированных кератиноцитов на рубцовую ткань, что может иметь практическое значение для реабилитации пациентов с различного вида рубцами.

Данная работа на крысах позволила также сформулировать требования, предъявляемые к раневым покрытиям, на которых выращиваются кератиноциты.

Раневые покрытия должны быть:

- биосовместимыми с клетками,

- воздухопроницаемыми,

- иметь эластичную, формообразующую основу,

-быть гидрофильными,

- в качестве лекарственных добавок содержать антибактериальные препараты и антиоксиданты не токсичные для культивированных клеток.

7.2.