5 Выделение стрептококков

5.1 Для выделения стрептококков используют среду Карташовой (рецепт 7), на которую высевают 1 мл исследуемого молока или пересевают выросшие на кровяном агаре росинчатые колонии.

5.2 Одним из отличительных признаков бактерий рода стрептококков от стафилококков является каталазная активность. Стрептококки - каталазоотрицательные, не содержат фермент каталазу. Для определения каталазной активности исследуемую культуру отвивают на косячок сывороточного агара (рецепт 3) выращивают в течение 24-48 часов. Выросшую культуру снимают петлей и растирают в капле 10%-ной перекиси водорода (пергидроль разводят в соотношении 1:3) на предметном стекле. Выделение газа, в отличие от стафилококков, у стрептококков не наблюдается.

5.3 Наличие гемолитических свойств стрептококков определяют путем посева на кровяной агар, который используют одновременно и для определения гемолитических свойств стафилококков. Большинство выделяемых из молока стрептококков дают непрозрачную (матовую) зону гемолиза. Дальнейшую идентификацию стрептококков ведут по таблице (приложение 2). Для определения свойств устойчивости к желчи культуру стрептококков выращивают предварительно на МПБ с 1% глюкозы (рецепт 9), а затем вносят 1 мл культуры в пробирки с 5 мл МПБ, содержащего 40% желчи (рецепт10) и ставят в термостат при температуре 37°С на 24 часа. Полное просветление бульона указывает на лизис культуры, помутнение - на рост.

5.4 Терморезистентность стрептококков определяют путем прогрева бульонной культуры стрептококка при 60^оС в течение 30 минут. Пробирки с бульонной культурой ставят в водяную баню с указанным температурным режимом. После прогрева культуру высевают на МПБ и инкубируют в термостате в течение 24-48 часов. Наличие роста в бульоне указывает на терморезистентность культуры.

5.5 Для определения способности культуры обесцвечивать метиленовый голубой производят посев культуры в пробирку с молоком, содержащим этот индикатор в концентрации 1:1000 (рецепт 11). Посевы инкубируют в термостате в течение 24 часов при температуре 37°С.

5.6 Постановка KAМП-теста. Суточную культуру бета-гемолитического стафилококка высевают на агар с 5% крови крупного рогатого скота (рецепт 1). Посев делают петлей сплошной линией по диаметру чашки. Перпендикулярно к линии посева стафилококка, не доходя 5-6 мм высевают ровным штрихом испытуемую культуру стрептококков. На одной чашке можно проверить 8-10 культур. Чашки помещает в термостат на 24 часа при 37^оС. КАМП-тест считают положительным, если четко выражена зона гемолиза испытуемого стрептококка в виде усеченного треугольника или полукруга в зоне гемолитического стафилококка. При необходимости серологической идентификации выделенных штаммов стрептококков, последние направляют в научно-исследовательские учреждения.

5.7 Оценка результатов исследований производится по таблице приложения 2.

5.8 Срок лабораторного исследования на стрептококк - 3 дня.