Выделение рекомбинантнного белка из биомассы

Экспрессированный рекомбинантный белок имеет на N-конце шесть дополнительных гистидновых остатков (6HisTag).

Метод металлаффинной хроматографии (IMAC) основан на том, что сорбент, заряженный ионами Ni²⁺ (или ионом другого переходного металла, например Cu²⁺, Fe²⁺, Co²⁺, Zn²⁺) связывает полигистидиновый участок, что позволяет очистить рекомбинантный белок из суммарной фракции белков с чистотой 80-90% за один раунд хроматографии.

Для выделения рекомбинантного белка с 6HisTag можно использовать любую коммерчески доступную смолу и протокол производителя.

Очищенный препарат флуоресцентного белка следует проанализировать:

1) снять спектр поглощения и флуоресценции на спектрофлуориметре;

2) при отсутствии флуориметра визуально анализировать флуоресценцию белкового препарата, возбуждая ультрафиолетом;

3) белковый препарат можно разделить методом ПААГ (полиакриламидный гель), при этом флуоресцентный белок, нанесенный в гель в неденатурирующих условиях, сохраняет флуоресценцию в процессе разделения.

3.