Определение активности каталазы (Карпищенко А.И., 1999)

Каталаза осуществля­ет распад перекиси водорода с образованием воды и молекулярного кислорода, снижение ее активности в эритроцитах и плазме крови наблюдается при развитии воспалительных процессов и интоксикации.

К 2,5 мл 0,3% раствора перекиси водорода добавляли 200 мкл гемолизата эритроцитов или плазме крови. Реакцию проводили 10 мин. при комнатной температуре, после чего останавливали внесением 0,3 мл 50% рас­твора трихлоруксусной кислоты (ТХУ). После центрифугирования в течение 10 мин. при 5000 об./мин. супернатант опытных и контрольных проб фотометрировали при длине волны 260 нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм против 5% раствора ТХУ.

Расчет активности каталазы производили по разнице экстинкции в опыте и контроле согласно закону Бугера-Ламберта-Бэра с учетом молярного коэф­фициента светопоглощения перекиси водорода по формуле:

где

А – активность фермента, ммоль/(схл);

∆Е – разность экстинкции контрольных и опытных проб;

V p.c. – объем реакционной смеси (3 мл);

V пр. – объем пробы, использованной для определения активности каталазы (0,2 мл);

l – длина оптического пути (1 см);

ε – молярный коэффициент светопоглощения Н2О2 (22 М-1 х см-1);

t – время инкубации (10 мин.).