Определение активности эритроцитарной глутатионпероксидазы

Принцип метода основан на измерении скорости окисления НАДФН в сопряженной глутатион - глутатионредуктазной системе, в качестве субстрата использовалась гидроперекись трет-бутила [176].

Оборудование: спектрофотометр SPECORD 205 с программным обеспечением WinAspect с термостатируемым блоком Пельтье и магнитной мешалкой, набор акриловых кювет, лабораторная посуда.

Ход определения’, в акриловую кювету вносили 650 мкл реакционной смеси, 20 мкл образца и в последнюю очередь 100 мкл гидроперекиси трет­бутила. Скорость изменения оптической плотности измеряли в течение 3 минут при 30°С на длине волны 340 нм. По получаемой кривой определяли изменение оптической ПЛОТНОСТИ за одну минуту (АА₃4о). Используя полученную величину рассчитывали активность глутатионпероксидазы по формуле:

ДА-un х 2 х К ГПО = _КьГх С_%„_ь

где ААз4о - изменение оптической плотности за одну минуту;

К - величина разбавления пробы в кювете;

КМ - коэффициент молярной экстинкции;

Со/онь - концентрация гемоглобина в отмытых эритроцитах.

Активность ГПО отражает возможность нейтрализации гидроперекисей липидов, накапливаемых при усилении различных прооксидатных влияний. Данная характеристика антиоксидатной защиты выражалась в единицах активности на миллиграмм гемоглобина (ед / мг НЬ).

2.4.6.