3.2.6 Определение фагоцитарной активности макрофагов
Для изучения реакций врожденного иммунного ответа мы избрали несколько методологических подходов, включающих взаимодействие резидентных макрофагов интактных животных со штаммами C.
neoformans разной вирулентности in vitro. Сроки проведения экспериментов максимально достигали 48 часов, что укладывается во временную концепцию развития реакций врожденного иммунитета (таблица 3).Таблица 3 – Продолжительность постановки реакций по изучению иммунного ответа на штаммы C. neoformans.
| № п/п | Название реакции | Продолжительность постановки реакции, ч |
| 1 | Поглотительная активность (собственно фагоцитоз) | 2 |
| 2 | Продукция NO | 48 |
| 3 | НСТ-тест | 48 |
| 4 | Выработка про- и противовоспалительных цитокинов | 24 |
| 5 | Микробоцидная активность Фагоцитов | 48 |
Перитонеальные макрофаги в концентрации 1х106/мл объемом 0,4 мл помещали в 4-луночные слайд-камеры (Chamber Slides, LabTek II, США) и инкубировали СО2-инкубаторе в течение 18 часов. Затем макрофаги отмывали забуференным физиологическим раствором, добавляли клетки C. neoformans (соотношение макрофагов и грибов 1:2) и инкубировали в аналогичных условиях
2 часа. Клетки трижды отмывали физиологическим раствором, фиксировали этанолом и окрашивали по Романовскому-Гимзе [277]. Препараты микроскопировали при 1000-кратном увеличении. Фагоцитарная функция макрофагов оценивалась прямым визуальным подсчетом поглощенных микроорганизмов. Фагоцитарный индекс (ФИ) определяли при подсчете не менее
300 клеток как отношение числа макрофагов, поглотивших криптококки, к общему числу макрофагов, выраженное в процентах. Фагоцитарное число (ФЧ) определяли как среднее количество криптококков, захваченных одной клеткой (оценка проводилась только в отношении фагоцитирующих клеток).
Еще по теме 3.2.6 Определение фагоцитарной активности макрофагов:
- 3.2.9 Определение цитотоксической активности перитонеальных макрофагов
- 5.3 Определение цитотоксической активности макрофагов по отношению к штаммам C. neoformans разной вирулентности
- Оценку фагоцитарной активности нейтрофилов
- Метод определения фагоцитарной реакции лейкоцитов крови
- Характеристика фагоцитарной активности лейкоцитов у больных многоформной экссудативной эритемы.
- Характеристика фагоцитарной активности лейкоцитов у больных фиксированной эритемой после лечения
- 5.2.6. Препараты, растительного происхождения, оказывающие влияние на фагоцитарную активность нейтрофилов, продукцию интерферона.
- 3.2.8 Определение уровня продукции цитокинов макрофагами
- Определение активностей глутатионредуктазы и глутатионпероксидазы.
- Определение активности эритроцитарной супероксиддисмутазы
- Определение активности супероксиддисмутазы в модификации
- Определение активности СОД (КФ 1.15.1.1.)
- 3.2.4. Определение фенолоксидазной активности C. neoformans