Определение активности глутатионредуктазы (Асатиани B.C., 1969)

Глутатионредуктаза (glutathione reducease; NADPH2 окисленный глутатион, оксидоредуктаза) – широко распространенный флавиновый фер­мент, катализирующий восстановление окисленного глутатиона.

Измерение проводили на спектрофотометре СФ-46 при длине волны 340 нм против воды; толщина кюветы – 1 см; температура 250С. В кювету последовательно отмеряли пипеткой: 2,4 мл раствора фосфат­ного буфера, 0,2 мл раствора GSSG, 0,2 мл раствора НАДФ-Н2, 0,2 мл гемолизата эритроцитов или плазмы крови, смешивали и отсчитывали экстинкцию Е0. Через 3 мин. отсчитывают экстинкцию Е3. Активность глутатионредуктазы рассчитывали по формуле:

где

А – активность фермента, мкмоль/(схл);

∆Е – разность экстинкции контрольных и опытных проб;

V p.c. – объем реакционной смеси (3 мл);

V пр. – объем пробы, использованной для определения активности глутатионредуктаты (0,2 мл);

1 – длина оптического пути (1 см);

t – время инкубации (180 с.)

ε – коэффициент микромолярной экстинкции НАДФН2 при λ=340 нм (6,22 х103).