3.2.9 Определение цитотоксической активности перитонеальных макрофагов

Клетки макрофагов в концентрации 1х106/мл вносили в лунки 96-

луночного планшета в количестве 0,1 мл. Добавляли равный объем среды RPMI с

10% ЭТС без ЛПС или с ЛПС в дозе 1 мкг/мл ; инкубировали 18 ч при 37 С СО2- инкубаторе.

Затем супернатант удаляли, к макрофагам добавляли 100 мкл культуры C. neoformans в концентрации 1х105/мл (соотношение 10:1), и равный объем полной среды. Во всех опытах проводилась постановка контроля криптококков без макрофагов. Через 48 часов совместной инкубации макрофагов и криптококков в СО2-инкубаторе, полученный супернатант удаляли. Затем в каждую лунку 96-луночного планшета вносили 100 мкл 0,02% додецил-сульфат натрия (Sigma), суспендировали и лизат добавляли в пробирки. Клетки дополнительно отмывали в 200 мкл стерильной дистиллированной Н2О. Из полученной смеси готовили разведение в соотношении 1:10, затем 100 мкл образца засевали на чашки Петри с плотной средой Сабуро, с последующей инкубацией в термостате при 370 С в течение 72 часов. Каждый эксперимент проводили в двукратной повторности. Киллерную активность оценивали как процент жизнеспособных клеток грибов после инкубации с макрофагами по сравнению с контрольным ростом грибов без макрофагов.

<< | >>

↑

Источник: ФИЛИППОВА Лариса Вячеславовна. ОСОБЕННОСТИ ИММУННОГО ОТВЕТА НА ШТАММЫ CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS РАЗНОЙ ВИРУЛЕНТНОСТИ. 2014

Еще по теме 3.2.9 Определение цитотоксической активности перитонеальных макрофагов:

- Кожные и венерические заболевания -

- Акушерство и гинекология - Анатомия - Андрология - Биология - Болезни уха, горла и носа - Валеология - Ветеринария - Внутренние болезни - Военно-полевая медицина - Восстановительная медицина - Гастроэнтерология и гепатология - Гематология - Геронтология, гериатрия - Гигиена и санэпидконтроль - Дерматология - Диетология - Здравоохранение - Иммунология и аллергология - Интенсивная терапия, анестезиология и реанимация - Инфекционные заболевания - Информационные технологии в медицине - История медицины - Кардиология - Клинические методы диагностики - Кожные и венерические болезни - Комплементарная медицина - Лучевая диагностика, лучевая терапия - Маммология - Медицина катастроф - Медицинская паразитология - Медицинская этика - Медицинские приборы - Медицинское право - Наследственные болезни - Неврология и нейрохирургия - Нефрология - Онкология - Организация системы здравоохранения - Оториноларингология - Офтальмология - Патофизиология - Педиатрия - Приборы медицинского назначения - Психиатрия - Психология - Пульмонология - Стоматология - Судебная медицина - Токсикология - Травматология - Фармакология и фармацевтика - Физиология - Фтизиатрия - Хирургия - Эмбриология и гистология - Эпидемиология -