9.1. Вектор.
Для клонирования продуктов ПЦР мы использовали плазмиду pGEM®-T Easy, входящую в состав системы pGEM®-T Easy Vector System ("Promega", США). Так как некоторые термостабильные ДНК-полимеразы, в частности Taq ДНК-полимераза, часто добавляют на 3' конец амлификата одиночный дезоксиаденозин, то вектор pGEM®-T Easy содержит в сайте клонирования на обоих 3' концах исскуствено добавленный одиночный концевой тимидин.
Эта модификация позволяет значительно увеличить эффективность лигирования продукта ПЦР и плазмиды, поскольку обеспечивает комплементарность концов продукта ПЦР и плазмиды и снижает вероятность самолигирования вектора. Отбор трансформированных клонов вели по их резистентности к ампицилину, обеспечиваемой вектором pGEM®-T Easy, и с помощью биохимического теста, именуемого бело-голубой селекцией. Несущие рекомбинантные плазмиды бактерии образуют колонии белого цвета, а бактериальные клоны, содержащие только плазмиду, - голубого. Полилинкер фланкируют промоторы T7 и SP6 РНК полимераз, что позволяет проводить определение нуклеотидной последовательности вставки, используя соответствующие праймеры.Лигирование фрагмента ДНК, полученного в результате ПЦР, с вектором pGEM®-T Easy проводили по методике, предложенной фирмой. Трансформацию компетентных клеток проводили всем количеством полученной рекомбинантной плазмиды.
Еще по теме 9.1. Вектор.:
- Клонирование
- Алгебраический подход к описанию функционирования сетей Петри.
- Метрики для классификации ситуаций
- Лигирование
- Амплификация полной кодирующей последовательности целевого гена. Клонирование и экспрессия гена флуоресцентного белка в бактериальной системе экспрессии (задача 4)
- Методика лечения хронического деструктивного периодонтита с использованием «Хитозана с серебром»
- Структурно-функциональные решения организации виртуальных потоков для двух альтернативных выборок
- Подбор структуры праймеров и амплифицикация ДНК для последующего клонирования
- 3.3 Метод прогнозирования риска пояснично-крестцовой радикулопатии на основе ассоциации решающих модулей
- Многофакторный анализ полученных данных
- Выбор системы экспрессии
- Культивация биомассы и индукция промотора
- 4.2 Метод синтеза виртуального потока для нейронной сети прямого распространения
- Опыт клинического применения таргетных препаратов при раке яичников
- Принцип Кюри-Пригожина.
- Вирусологическое исследование на наличие антител в сыворотке крови
- Содержание общих иммуноглобулинов А, G, М классов
- Иммунологическое исследование.
- Существование и сходимость приближенного решения
- Формализованные математические описания поведения систем для их базовых моделей
-
Детская онкология -
Кардиоонкология -
Лечение онкологических заболеваний -
Онкогастроэнтерология -
Онконефрология -
Паллиативная медицина -
-
Акушерство и гинекология -
Анатомия -
Андрология -
Биология -
Болезни уха, горла и носа -
Валеология -
Ветеринария -
Внутренние болезни -
Военно-полевая медицина -
Восстановительная медицина -
Гастроэнтерология и гепатология -
Гематология -
Геронтология, гериатрия -
Гигиена и санэпидконтроль -
Дерматология -
Диетология -
Здравоохранение -
Иммунология и аллергология -
Интенсивная терапия, анестезиология и реанимация -
Инфекционные заболевания -
Информационные технологии в медицине -
История медицины -
Кардиология -
Клинические методы диагностики -
Кожные и венерические болезни -
Комплементарная медицина -
Лучевая диагностика, лучевая терапия -
Маммология -
Медицина катастроф -
Медицинская паразитология -
Медицинская этика -
Медицинские приборы -
Медицинское право -
Наследственные болезни -
Неврология и нейрохирургия -
Нефрология -
Онкология -
Организация системы здравоохранения -
Оториноларингология -
Офтальмология -
Патофизиология -
Педиатрия -
Приборы медицинского назначения -
Психиатрия -
Психология -
Пульмонология -
Стоматология -
Судебная медицина -
Токсикология -
Травматология -
Фармакология и фармацевтика -
Физиология -
Фтизиатрия -
Хирургия -
Эмбриология и гистология -
Эпидемиология -