Выбор системы экспрессии

Ген флуоресцентного белка может быть экспрессирован в любой гетерологической системе, используемой в лаборатории. В рамках практикума предложено выполнить экспрессию гена флуоресцентного белка в бактериях E.coli, использовав для этого вектор pQE-30 (Qiagen, рис.

Выбор этого вектора определяется тем, что, во-первых, им можно трансформировать большинство распространенных штаммов E. coli, например XL1-Blue. Во-вторых, вставка находится под контролем T5 промотора c /ас-оператором, который имеет базальный уровень экспрессии, т.е. "течет". Следовательно, в клетке непрерывно происходит синтез флуоресцентного белка и без индукции изопропил-Б-тио-галактопиранозидом (IPTG), что упрощает поиск целевых клонов по их фенотипу - флуоресценции в ультрафиолете. И, в-третьих, наличие в векторе участка, кодирующего N-концевой шестигистидиновый пептид (6HisTag), позволяет провести одностадийную очистку рекомбинантного продукта, используя метод металлаффинной хроматографии (IMAC).

2.5.2.