Амплификация полной кодирующей последовательности целевого гена. Клонирование и экспрессия гена флуоресцентного белка в бактериальной системе экспрессии (задача 4)

В результате 3'- и 5'-RACE определены фланкирующие последовательности кДНК-копии гена. Следующим этапом является клонирование последовательности кДНК (либо полноразмерной копии, либо только кодирующей последовательности) в плазмидный вектор.

Процесс клонирования предполагает следующие шаги:

1) подбор структуры праймеров и амплифицикация ДНК для последующего клонирования;

2) выбор вектора для клонирования и соответствующего штамма-продуцента;

3) лигирование вектора и вставки (целевого фрагмента ДНК);

4) трансформация;

5) отбор клонов, несущих рекомбинантные плазмиды.

Разберем последовательность действий на примере клонирования гена флуоресцентного белка более подробно.

2.5.1.