Подбор структуры праймеров и амплифицикация ДНК для последующего клонирования
Опираясь на данные, полученные в ходе 3'- и 5'-RACE, определяют структуру пары встречных праймеров, которые специфично отжигаются на искомой последовательности. В структуру праймеров вводятся сайты узнавания эндонуклеаз рестрикции (в задаче это BamHI и HindIII), которые позволят клонировать фрагмент ДНК в полилинкер вектора.
При дизайне праймеров для клонирования в экспрессионную конструкцию, необходимо следить за сохранением рамки считывания, чтобы первый аминокислотный триплет вставки находился в той же рамке, что и стартовый кодон ATG в векторе. Необходимо проследить, чтобы 3'-конец кодирующей последовательности содержал стоп-кодон в соответствующей рамке.
Рис. 2.5. Схема быстрой амплификации 5'-концевого фрагмента целевого транскрипта в двух раундах амплификации с применением технологий nested ПЦР и step-out ПЦР. Прямоугольниками обозначены праймеры, адаптеры и
комплементарные им последовательности. GSP - генспецифический праймер
2.5.1.
Еще по теме Подбор структуры праймеров и амплифицикация ДНК для последующего клонирования:
- Направленное клонирование фрагмента ДНК
- ПОДГОТОВКА КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ПЦР-ДИАГНОСТИКИ. ПОДГОТОВКА МОКРОТЫ И МОЧИ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ДНК
- Подбор бактерий-продуцентов ЦГТазы для процессов получения циклодекстринов
- 7.1. Праймеры.
- Амплификация полной кодирующей последовательности целевого гена. Клонирование и экспрессия гена флуоресцентного белка в бактериальной системе экспрессии (задача 4)
- Клонирование
- Ребриков Д.В. и др.. Применение современных молекулярно-биологических методов для поиска и клонирования полноразмерных нуклеотидных последовательностей кДНК: Учебное пособие. М.: НИЯУ МИФИ,2011. - 88 с., 2011
- 7.3. Метилчувствительная ПЦР со специфическими праймерами.
- Нейронные сети для построения базовых структур автономных агентов для прогнозирования инсультов
- 7.2. Метилчувствительная ПЦР со статистическими GC-богатыми праймерами.
- Дизайн вырожденных праймеров
- 1.1. Принцип метода метилчувствительной ПЦР со статистическими GC- богатыми праймерами.
- Привязанность и последующее развитие
- Расправление и последующая тампонада сетчатки
- Типы образовательных структур для обучения одаренных детей.
- Структура обсервационного пункта и требования, предъявляемые для его развертывания.