9.2. Получение компетентных клеток Escherichia coli.

Для получения компетентных клеток мы использовали штамм XL1-Blue Escherichia coli и стандартный метод с применением CaCl2 и RbCl (под ред. Гловера 1988).

В 500 мл колбу вносили 50 мл среды SOС и 1 мл ночной культуры бактерий.

Наращивали клетки при 37оС с интенсивным перемешиванием до плотности -5-10 клетка/мл, что для данного штамма соответствует оптической плотности D550 = 0.5. После достижения бактериальными клетками необходимой концентрации переносили культуру в полипропиленовые пробирки и охлаждали в ледяной бане в течение 15 мин. Затем осаждали клетки центрифугированием при 3 тыс. об/мин в течение 15 мин при 4оС и тщательно удаляли супернатант. Далее ресуспендировали клетки в объеме буфера RF1, составляющем 1/3 от собранного объема, и инкубировали клетки в ледяной бане в течение 15 мин. Осаждали клетки как описано выше. Потом ресуспендировали клетки в буфере RF2 (1/12.5 исходного объема) и инкубировали в ледяной бане в течение 15 мин. После этого суспензию клеток разделяли на аликвоты по 100 мкл в охлажденные 1.5 мл микроцентрифужные пробирки и быстро замораживали в жидком азоте. Компетентные клетки хранили при температуре -70оС.

<< | >>

↑

Источник: ПЕТРЕНКО АНАТОЛИЙ АНАТОЛЬЕВИЧ. Анализ метилирования ДНК при раке шейки матки. 2003

Еще по теме 9.2. Получение компетентных клеток Escherichia coli.:

- Детская онкология - Кардиоонкология - Лечение онкологических заболеваний - Онкогастроэнтерология - Онконефрология - Паллиативная медицина -

- Акушерство и гинекология - Анатомия - Андрология - Биология - Болезни уха, горла и носа - Валеология - Ветеринария - Внутренние болезни - Военно-полевая медицина - Восстановительная медицина - Гастроэнтерология и гепатология - Гематология - Геронтология, гериатрия - Гигиена и санэпидконтроль - Дерматология - Диетология - Здравоохранение - Иммунология и аллергология - Интенсивная терапия, анестезиология и реанимация - Инфекционные заболевания - Информационные технологии в медицине - История медицины - Кардиология - Клинические методы диагностики - Кожные и венерические болезни - Комплементарная медицина - Лучевая диагностика, лучевая терапия - Маммология - Медицина катастроф - Медицинская паразитология - Медицинская этика - Медицинские приборы - Медицинское право - Наследственные болезни - Неврология и нейрохирургия - Нефрология - Онкология - Организация системы здравоохранения - Оториноларингология - Офтальмология - Патофизиология - Педиатрия - Приборы медицинского назначения - Психиатрия - Психология - Пульмонология - Стоматология - Судебная медицина - Токсикология - Травматология - Фармакология и фармацевтика - Физиология - Фтизиатрия - Хирургия - Эмбриология и гистология - Эпидемиология -