Культивирование лямблий.

Ни на одной из приведенных выше сред для кишечных простейших лямблии не растут. Разработка метода культивирования их представляла трудную задачу. Разрешение ее впервые удалось только в 1960 г.

Первичным посевным материалом для выделения культур служит дуоденальное содержимое, которое подвергают центрифугированию при 600—1000 об/мин в течение 10 мин, предварительно смешав с двукратным объемом солевого раствора Хэнкса. После этого жидкость отсасывают, к осадку добавляют

2— 3 мл раствора Хэнкса и снова центрифугируют.Такоепромы- вание осадка производят 3—4 раза. Затем к осадку добавляют

1— 2 мл раствора Хэнкса, тщательно перемешивают и засевают по 0,2—0,5 мл во флаконы с 1—2 мл среды. Пригодны только флаконы из кварцевого стекла — выпускаемыедляпенициллина или инсулина, предварительно обработанные хромовой смесью. B каждый флакон после посева вносят петлю 1—2-суточной культуры пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Флаконы инкубируют в наклонном (до 5—7°) или горизонтальном положении. Через 2—3 ч после посева лямблии прикрепляются к нижней поверхности флаконов, вслед за чем среду отсасывают пастеровской пипеткой, заменяя ее 3,5 мл свежей среды. Следующую замену 2/3 среды свежей производят после суток

инкубирования, а в дальнейшем 3 раза в неделю. Раз в неделю добавляют 1—2 петли свежей культуры дрожжей. Так удавалось длительно культивировать лямблии кроликов Lamblia duo- denalis (A. E. Карапетян, 1961; M. M. Соловьев с соавт., 1971).

Лямблии человека таким же образом сначала выделяются на культуре куриных фибробластов, выращенных на среде Карапетяна.

Среда Карапетяна Li-3 для культивирования лямблий человека включает следующие составные части: 1) сыворотка крови человека, инактивированная прогреванием 30 мин при 56° и профильтрованная через фильтр Зейца — 25%; 2) триптический гидролизат белка по Хоттингеру — 20%; 3) куриный эмбриональный экстракт из 11 — 12-дневных эмбрионов (можно заготовлять впрок и хранить в замороженном состоянии при —7—10° до 4 месяцев), 4) солевой раствор Хэнкса — 50%, 5) пенициллин — 500 ЕД/мл, 6) стрептомицин — 200 ЕД/мл.

M. M. Соловьев с соавт. (1971) модифицировали среду Карапетяна для L. duodenalis следующим образом: растворХэнкса — 65%, сыворотка крови человека—10%, 10% раствор желатина (готовый препарат «10% желатина в ампулах для инъекций»)— 10%, препарат Хоттингера—10%, куриный эмбриональный экстракт — 5%. Уменьшение количества сыворотки дает снижение количества неспецифических антител против лямблий, что улучшает условия их культивирования, а добавление желатина сохраняет необходимую вязкость среды.

Для приготовления среды ее компоненты без куриного эмбрионального экстракта смешивают, через смесь пропускают небольшое количество углекислого газа, разливают по 95 мл в колбы, закрытые резиновыми пробками. Сохраняют среду при

4— 6°. Перед употреблением в каждую колбу добавляют 5 мл куриного эмбрионального экстракта.