Подготовка посевного материала для глубинного культивирования

Для засева производственной среды при глубинном способе культивирования посевной материал готовят также глубинным способом. Вид посевного материала зависит от продуцента: для грибов и актиномицетов — это мицелиальная масса, а для бактерий — молодая спороносящая культура.

Этапы получения посевной культуры следующие:

1) обновление исходной культуры на агаризированной среде;

2) выращивание культуры на жидкой среде в колбах на качалке;

3) культивирование продуцента в малом, а затем, если требуется, в большом инокуляторе.

Посевная доза при засеве глубинной культурой сравнительно большая — от 1 до 25% , поэтому

число стадий и объем инокуляторов определяются только производительностью предприятия и оп­тимальной нормой расхода посевного материала для данного продуцента.

Схема приготовления посевного материала для глубинного культивирования приведена на рис. 3. Исходный продуцент из пробирки 1 пересевают на матрацы 2 с большим количеством ага­ризированной среды. С матрацев культуру смывают стерильной водой и в виде суспензии исполь­зуют для засева колб 3. Чаще засев ведут сразу из пробирки в колбы.

Колбы закрепляют на качалке 4, которая встряхивает жидкость в колбах и способствует раство­рению кислорода в среде, что обеспечивает нормальные условия жизнедеятельности микроорга­низмов.

Готовую культуру из колб собирают в одну емкость при соблюдении правил асептики и перено­сят в малый инокулятор 5 со стерильной охлажденной средой. Засев ведут в пламени горящего фа­кела через посевной патрубок инокулятора. В малый инокулятор через индивидуальный фильтр 6 подается стерильный воздух. Подготовку, стерилизацию и охлаждение питательной среды произ­водят в малом инокуляторе. Пеногаситель стерилизуют и охлаждают в специальной емкости и по­дают в малый инокулятор по мере надобности.

, Для большого инокулятора 7 среду готовят, как правило, в специальных аппаратах, затем ее стерилизуют, охлаждают примерно до 30-40 °С и подают в стерильный охлажденный до 60-70 °С большой инокулятор, выравнивают температуру среды до оптимальной для выращиваемого мик­роорганизма. После этой операции готовую культуру из малого инокулятора передавливают сте­рильным воздухом в большой инокулятор на свежую питательную среду.

Культивирование на всех стадиях ведется при оптимальной температуре и аэрировании. Обычно готовый посевной материал сразу же передают в производство. Если же возникают непред­виденные задержки, то посевной материал непосредственно в инокуляторе охлаждают до 8-10 °С, но хранят не более 2—3 ч, иначе его качество может резко ухудшиться. Посевной материал, полу­ченный любым способом, подвергается микробиологическому и биохимическому контролю.

Посевной материал считается активным, если он обеспечивает нормальную длительность куль­тивирования на производственной среде и достижение максимального накопления целевого про­дукта за этот срок.

1.1.4.