4 Подсчет колоний

4.1 Для подсчета выросших колоний чашку кладут вверх дном на темный лист бумаги. При небольшом росте колоний их подсчитывают невооруженным глазом на всей площади чашки. Подсчитанные колонии отмечают на чашке восковым карандашом или чернилами.

4.2 При равномерном распределении колоний можно подсчитывать на 1/2 или 1/4 площади чашки. Если колоний выросло много (более 600), лучше пользоваться камерой Вольфгюгеля для подсчета колоний, которая состоит из стеклянной пластинки, разделенной на 144 квадрата площадью 1 см² каждый. Для подсчета чашку кладут под стеклянную пластинку и подсчитывают колонии при ярком боковом освещении. При сравнительно равномерном распределении колоний их подсчитывают в 10 квадратах, расположенных в разных участках чашки.

4.3 Вычисление количества микробных тел в 1 мл или 1 г исследуемого материала проводят по формуле:

, где

С — количество микробных тел в 1 мл;

N — количество подсчитанных колоний;

D — степень разведения исследуемого материала;

V — объем раствора, взятого для посева;

S — площадь чашки, на которой произвёден подсчет колоний.

Например, было высеяно 0,5 мл (V) разбавленной 1:10 (D) спермы. Подсчет колоний произведен на 1/4 чашки (S), насчитано 20 колоний (N). В этом случае

колоний, следовательно, 1600 микробных тел в 1 мл.

4.4 Вычисление количества микробных тел в 1 мл или 1 г исследуемого материала при использовании камерой для подсчета колоний проводят следующим образом: количество колоний, подсчитанных в 10 квадратах, складывают и определяют число микробных тел по формуле:

,где

πR² — площадь чашки;

п — количество сосчитанных квадратов.

Например, при высеве 0,5 мл разведенной 1:10 спермы в каждом из 10 квадратов насчитано колоний: 8, 10, 12, 11, 7, 14, 8, 12, 18 и 14 = 114.

В этом случае микробных тел.

Таким же образом подсчитывают число пробных тел для данной пробы и по остальным трем чашкам. Результат подсчета колоний записывают в журнал и окончательно определяют количество микробных тел в 1 мл или в 1 г исследуемой пробы по среднему вычислению.

Складывают только те числа, которые имеют расхождение не более 22%. Например, если по 4 чашкам подсчитано 250, 290, 270 и 450 микробных тел, то вычисление ведут из расчета трех чашек, в четвертой чашке (450 микробных тел) результат не учитывают.

При записи результатов подсчета количества микробных тел полученное число округляют из расчета: