Критерии и методы оценки чистоты культуры бактерий

Работа с собственно чистой культурой начинается со стадии получения изолированной колонии бактерии. При этом исходят из положения, что колония является продуктом деления одной клетки или группы клеток в случае образования ими цепочек, тетрад и так далее.

По вышеизложенным причинам заключение о чистоте культуры можно делать только после двух-трех пассажей, причем на неселективных средах. С отвивкой субкультур из колоний не следует спешить, чтобы имелось время для формирования колоний бактерий, растущих более медленно, чем искомый микроорганизм. При более длительном культивировании колоний бактерии также во многих случаях приобретают в полной мере морфологические признаки, характерные для данного вида бактерий (исчерченность поверхности, наличие приподнятого центра, пигментообразование и так далее). В тоже время характеристики колоний следует учитывать с момента формирования макроскопических видимых колоний, так, как, например, флуоресценция, цвет колоний в косопроходящем пучке света зависят от возраста культуры, они хорошо видны у молодых и слабо выражены у двух-трехсуточных культур.

Критериями чистоты культуры в основном являются однотипность колоний, одинаковая морфология и тинкториальные свойства составляющих их клеток. Но при этом надо учитывать, что в результате диссоциации чистая культура может дать колонии разных типов (S, R), а некоторые виды бактерий склонны к полиморфизму или проявляют вариабельность при окраске по Граму.

При оценке чистоты культуры существенное значение имеет объективное стереотипное описание морфологии колоний, а также характера роста субкультур в жидких питательных средах, поскольку эти признаки для каждого вида патогенных бактерий известны, а без их определения о чистоте культуры трудно судить.

С целью изучения колоний на плотных средах в чашках Петри посевы первоначально просматривают невооруженным глазом, отмечают на дне чашки однотипные колонии, затем изучают отобранные колонии при помощи стереоскопического микроскопа, например МБС-10, а также в косопадающем пучке света при освещении по методу Акатовой.

У колоний определяют величину (точечные — диаметр менее 1 мм, мелкие — 1-2 мм, средние — 2-4 мм, крупные — 4-6 мм и более), форму (круглая, неправильная амебовидная, ризоидная или корневидная), характер краев (гладкий, волнистый, лопастной, зубчатый, бахромчатый, складчатый). Профиль колонии определяют, глядя сбоку. Различают колонии правильной куполообразной формы; плосковыпуклые — центр плоский, края пологие, в разрезе колония имеет форму трапеции; конусообразные — в разрезе имеют форму треугольника; пупковидные — центр приподнят в виде соска; колонии со вдавленным центром; плоские колонии различной толщины. Поверхность колонии может быть матовой, блестящей, сухой или влажной, гладкой или шероховатой. Структуру колоний исследуют под малым увеличением микроскопа Структура может быть зернистой (мелко-, грубо-), нитевидной или волокнистой, а также без видимой определенной структуры. Консистенцию колонии определяют прикосновением к колонии бактериологической петлей. По консистенции выделяют пастообразные, слизистые, кожистые и сухие, хрупкие колонии.

У субкультур, отвитых из колоний на жидкие питательные среды, оценивают степень помутнения среды: слабое, среднее и интенсивное; наличие осадка: малое, среднее, большое количество; и его характер: крошковидный, хлопьевидный, рыхлый, компактный, слизистый, бесцветный или пигментированный; наличие поверхностной пленки и ее свойства: тонкая, нежная, бесцветная; сухая, сморщенная, кожицеобразная; влажная, толстая, слизистая и т.д.

Цвет жидкой питательной среды зависит от типа пигмента. Иногда поверхностный рост наблюдают в виде пристеночного кольца по краю мениска питательной среды. Пристеночное кольцо может быть выражено слабо или интенсивно, быть прочным или легко смывающимся при встряхивании, фуоресцирующим или нет. Нередко наблюдается пристеночный рост бактерий: среда остается прозрачной, на внутренней стенке пробирки формируются зерна, хлопья, слизистые структуры в виде сталактитов. При описании признаков колоний, характера роста на жидких средах целесообразно по возможности использовать однотипные термины.

Исследование культуральных признаков выделенного микроорганизма сочетают с одновременным исследованием морфологических и тинкториальных свойств клеток бактерий. В том случае, если проводится параллельное изучение субкультур из нескольких однотипных колоний, окончательное заключение об их идентичности делается на основании определения дополнительных признаков: ферментативных, антигенных и т.д.