3 Определение общего числа бактерий

3.1 Для определения общего числа бактерий в 1 мл или 1 г пробы применяют 1,5-2%-ный МПА с добавлением 1% глюкозы (на 1 л мясопептонного бульона добавляют 15-20 г агара, 10 г глюкозы), рН среды устанавливают 7-7,2, стерилизуют обычным методом.

3.2 Посевы спермы производят из разведений 1:10 или 1:100 на 3 чашки в зависимости от степени ожидаемого загрязнения или из 2-х разведений на 4 чашки (по 2 чашки из каждого разведения).

3.3 При высеве небольшого объема пробы делают последовательные разведения. С этой целью в пробирку с 9 мл стерильного физиологического раствора вносят 1,0 мл исследуемого материала и тщательно перемешивают. Получают разведение 1:10 (в 1 мл такого раствора содержится 0,1 мл пробы). Затем из пробирки первого разведения пипеткой переносят 1 мл раствора во вторую пробирку с 9 мл физиологического раствора (второе разведение 1:100; в 1 мл раствора содержится 0,01 мл пробы). Так поступают до получения необходимого разведения.

3.4 При разведении можно пользоваться одной пипеткой, но при этом необходимо растворы набирать резиновой грушей или полиэтиленовым баллончиком и тщательно (не менее 3 раз) промывать пипетку раствором из той пробирки, в которую перенесли суспензию. Если эти требования не могут быть выполнены, то для каждого разведения берут новую стерильную пипетку. Следует учитывать, что при приготовлении разведений пользование одной пипеткой в отдельных случаях может привести к завышению показателей вследствие адсорбции микроорганизмов на стенках пипетки. В результате адсорбированные микробы могут попадать в пробирку с гораздо большим разведением.

3.5 Рекомендуются три метода посева материала:

а) посев на поверхность МПА, заранее разлитого в бактериологические чашки (поверхностный пластинчатый метод);

б) разлив в пустые стерильные бактериологические чашки посевного материала, предварительно смешанного с 10-15 мл расплавленного агара при температуре 45-46^оС (метод одновременных разливок);

в) высев на поверхность застывшего МПА, предварительно смешанного с 2-3 мл подогретого 0,75-1% агара (двухслойный метод).

3.6 При исследовании сухих препаратов на стерильность в камере или стерильном боксе отвешивают 1 г пробы на обеззараженных весах. Навеску растворяют в 9 мл стерильной дистиллированной воды и взбалтывают в течение 10-15 минут. После полного растворения пробы делают ряд разведений в зависимости от предполагаемого загрязнения и высевают на среду. При подсчете количества микробных тел в 1 г первую пробирку, в которой растворяли пробу, считают за разведение 1:10.

3.7 Материал засевают в объемах не более 1 мл и не менее 0,3 мл стерильной пипеткой. При использовании чашек с заранее приготовленным агаром их перед посевом выдерживают в термостате 24 часа (проверка на стерильность). Суспензию, нанесенную на МПА, равномерно распределяют по всей поверхности агара стерильным шпателем, который делают из стеклянной палочки или пастеровской пипетки. Распределяют суспензию до полной ее адсорбции агаром. Чашки помещают в термостат и выдерживают при 37-37,5°С 24 часа.