2.5.5 Отбор клонов, несущих рекомбинантные плазмиды

Обычно для отбора целевых рекомбинантных клонов после трансформации либо применяют рестрикционный анализ плазмидной ДНК, либо проводят скрининг бактериальных колоний методом ПЦР.

Однако, как уже говорилось, в случае работы с генами флуоресцентных белков, рекомбинантные колонии можно легко отобрать по их фенотипическому проявлению - флуоресценции, которую можно детектировать с помощью любого флуоресцентного микроскопа или бинокуляра. Можно также использовать УФ-лампу, однако надо иметь в виду, что облученные УФ бактерии в основном гибнут, что затруднит дальнейшую работу по наращиванию биомассы.

В случае отсутствия флуоресценции чашку следует оставить на +4°С в холодильнике на 1-2 сут. для того, чтобы дать флуоресцентному белку «созреть» (сформировать правильную трехмерную структуру), после чего повторно проанализировать колонии на наличие флуоресценции. Успешным результатом задачи является получение флуоресцирующих бактериальных колоний.

2.6.