ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА ФЕТАЛЬНОГО ГЕМОГЛОБИНА ПО МЕТОДУ БЕТКЕ И СОАВТОРОВ
В основе метода лежит высокая устойчивочть HbF к воздействию щелочей. Реактивы:
1. Трансформирующий раствор - 1 г NaHC03; 0,2 г K3Fe(CNs) и 0,2 г KCN до 1 литра дистиллированной воды.
2. Денатурирующий раствор -1,2 N расттвор гидроксида натрия.
3. Осаждающий раствор - насыщенный раствор (NH4)2S04.
66
Для приготовления осаждающего раствора 500 г (NH4)2S04 растворяют в 1 л дистиллированной воды, подогревают до 70 градусов Цельсия, взбалтывают, фильтруют и охлаждают. При охлаждении в растворе выпадают кристаллы, свидетельствующие, что раствор насыщен.
Ход определения: для определения HbF 0,2 гемолизата добавляют к 3,8 мл трансформирующего раствора в пробирку № 1, которую оставляют стоять в течение 30 мин. для полного превращения НЬ в цианметтемоглобин. Затем 2,8 мл раствора цианметгемоглобина переносят в пробирку № 2 и добавляют 0,2 мл денатурирующего раствора, хорошо перемешивают и оставляют на 2 мин. Спустя 2 мин. денатурацию прерывают, добавляя 2 мл осаждающего раствора, хорошо встряхивают содержимое пробирки и через 5 минут фильтруют через двойной слой фильтра в пробирку № 3. В ней Нв F остается в растворе, который готов к фотометрированию (раствор N1 для фотометрирования).
Чтобы выяснить концентрацию общего НЬ в пробирку № 4 добавляют 0,4 мл разбавленного гемолизата из пробирки № 1 и 6,75 мл дистиллированной воды (раствор № 2 для фотометрирования). Оптическую плотность растворов № 1 и № 2 вычисляют на спектрофотометре при длине волны 540 ммк и кювете 1 см.
Относительное количество HbF вычисляют по формуле:
Показатели денситометра опыта (раствор № 1) х 100
Показатели денситометра контроля (раствор №2) х 100
Как уже указывалось выше, у здоровых взрослых людей содержание HbF равно примерно 1 -2%. При СКА содержание HbF бывает повышено - обычно 1-6% от общего количества гемоглобина, у отдельных больных -до 15%. В целом, можно констатировать, что уровень HbF в крови варьирует в значительной степени у разных индивидуумов. Результаты исследования у 100 больных, проведенного Espinosa (1976), дают возможность вывести усредненное значение содержания HbF, равное 5,7%.
Еще по теме ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА ФЕТАЛЬНОГО ГЕМОГЛОБИНА ПО МЕТОДУ БЕТКЕ И СОАВТОРОВ:
- Определение количества Т-лимфоцитов методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Еа-РОК) (Jondal M., 1997)
- 2.5 Определение количества CD4 лимфоцитов
- Методические рекомендации по определению количества микробных клеток в исследуемом материале
- 2.1 Определение общего количества микробных клеток
- ГЕМОГЛОБИН И ЦВЕТОВОЙ ПОКАЗАТЕЛЬ
- ГЛАВА 1. ГЕМОГЛОБИН S И СЕРПОВИДНОКЛЕТОЧНАЯ БОЛЕЗНЬ
- СЕРПОВИДНЫЙ ГЕМОГЛОБИН И СЕРПОВИДНОКЛЕТОЧНАЯ БОЛЕЗНЬ
- Влияние фуллеренола Сбо(ОН)24 на содержание гемоглобина цельной крови и небелковых тиолов печени
- 3 Методы определения соматических клеток
- 1.5 Современные методы определения чувствительности Candida spp. к противогрибковым препаратам
- Метод определения содержания селена в биологических образцах
- Ориентировочный метод определения гемианопсий
- 13. Методы определения профессиональной пригодности
- 4.2 Результаты определения чувствительности возбудителей инвазивного кандидоза методом CLSI M44 - A
- Метод определения фагоцитарной реакции лейкоцитов крови
- Уровень тканевого кровотока и его определение методом клиренса