2.1 Определение общего количества микробных клеток

2.1.1 В стерильную пробирку помещают 1 г корма, взятого из среднего образца (взятие корма для навески одноразовое), добавляют 9 мл физиологического раствора и тщательно встряхивают (получают разведение 1:10).

Для количественного учета микробного обсеменения в стерильные бактериологические чашки вносят по 1 мл каждого разведения и заливают 10-15 мл стерильного, расплавленного и охлажденного до температуры 44-45^оС мясо-пептонного агара. Осторожно покачивая чашки, засеянный материал равномерно распределяют в агаре. После застывания среды чашки помещают (вверх дном) в термостат при температуре 30 ^оС.

После 72-часового термостатирования проводят подсчет выросших колоний (чечевицеобразные) только в чашках, где содержатся не более 300 колоний. Результаты, полученные при подсчете колоний, умножают на разведения, суммируют и определяют количество микробов в 1 г корма.

Например, в одной чашке оказалось 200 колоний, в другой - 21 и в третьей - 1.В эти чашки посев проводили из пробирок с разведениями соответственно – 1:10000, 1:100000 и 1:1000000. Следовательно, 1 г корма содержит:

млн. микробов клеток.

2.1.2 Определение общей бактериальной обсемененности мясокостной муки можно проводить экспрессным методом с применением резазурина.

Для этого в стерильную пробирку помещают 1 г мясокостной муки, взятой из среднего образца, добавляют 10 мл МПБ и встряхивают, а в другую пробирку для контроля вносят только 10 мл МПБ и помещают их в термостат при 40°С на 2 часа.

После этого в пробирки добавляют по 1 мл 0,01%-ного раствора резазурина и вновь выдерживают в термостате в течение двух часов.

Результаты реакции учитывают в этот период через каждые 30 минут. По восстановлению резазурина (изменение окраски от синего до розового цвета) определяют общую микробную обсемененность мясокостной муки.

Если в пробирке с мясокостной мукой наступает розовое окрашивание позднее 2 часов, это соответствует бактериальной обсемененности до 500 тыс. микробных клеток в 1 г продукта, а при окрашивании содержимого пробирки в розовый цвет до 2 часов - более 500 тыс.

Контролем служит пробирка с 10 мл МПБ и 1 мл 0,01%-наго раствора резазурина, выдержанная в термостате при том же температурном режиме и экспозиции и без изменения цвета содержимого.