Метод определения фагоцитарной реакции лейкоцитов крови

Оценку функциональной активности полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови проводили в тесте с микробной тест-культурой (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989). Фагоцитарная активность лейкоцитов определялась при помощи процентного отношения активных, участвовавших в фагоцитозе лейкоцитов, к общему числу подсчитанных нейтрофильных лейкоцитов.

Фагоцитарный индекс определялся средним числом фагоцитированных микробов, приходящихся на один активный лейкоцит. Фагоцитарный индекс характеризует интенсивность фагоцитоза. Для определения фагоцитарного индекса использовали те же мазки, по которым определялась фагоцитарная активность лейкоцитов. В препаратах, приготовленных описанным выше способом, подсчитывали не менее 100 лейкоцитов и количество поглощенных ими микробных тел. Вычислялся фагоцитарный индекс путем деления числа фагоцитированных бактерий на число активных лейкоцитов.

Фагоцитарное число является дополнительным показателем, характеризующим как агрессивность лейкоцитов, так и их активность. Вычислялось фагоцитарное число путем деления числа фагоцитированных бактерий на общее число подсчитанных лейкоцитов.

Для определения индекса завершенности фагоцитоза в мерную центрифужную пробирку с 5 мг щавелевокислого натрия вносили 0,5 мл исследуемой крови. После тщательного перемешивания в пробирку добавляли равное количество двухмиллиардной взвеси микроорганизмов. После перемешивания смесь помещали в термостат при 37о С на 30 мин. Затем, несколько капель исследуемой лейкоцитарно-микробной взвеси вносили в чашку Петри с застывшим хорошо подсушенным 2%-ным мясо-пептонным агаром.

Засеянные чашки помещали в термостат, при 37о С для выращивания микробов и наступления третьей фазы фагоцитарной реакции, т.е. захватывания микробов фагоцитами. После окончания установленного срока инкубации приступали к изготовлению мазков-отпечатков. Приготовленные мазки-отпечатки высушивали и окрашивали способом Романовского-Гимза.

При микроскопировании препаратов, приготовленных из лейкоцитарно-микробной взвеси, инкубированной в термостате, отчетливо были видны различия между жизнеспособными и нежизнеспособными клетками. Первые характеризовались гигантскими размерами, вторые сохраняли исходную величину. В случаях, когда процесс фагоцитоза носил завершенный характер, внутри лейкоцитов отмечались фрагменты разрушенных клеток, имеющих разнообразную форму и отдельные микробные тела значительно меньших размеров, чем в лейкоцитах с незавершенным фагоцитозом.