Определение количества Т-лимфоцитов методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Еа-РОК) (Jondal M., 1997)

Феномен розеткообразования заключается в способности Т-лимфоцитов человека спонтанно адсорбировать эритроциты барана. Клетки, образующие розетки с эритроцитами барана, в литературе обычно называют сокращенно Еа-РОК (Еа – эритроцит, РОК – розеткообразующая клетка).

Определение проводили смешивая 1% смесь отмытых эритроцитов барана, 0,6% раствор глютарового альдегида, краску Романовского, 0,01 М раствор теофиллина, среду 199 Хенкса, 1% раствор бычьего альбумина, раствор фиколла-400, раствор уротраста, 3% раствор уксусной кислоты и 0,2% раствор трипанового синего.

Готовят стандартную взвесь лимфоцитов 2·109 клеток в 1 мл, в центрифужную пробирку вносят 0,1 мл взвеси лимфоцитов и 0,1 мл 1% взвеси эритроцитов барана, полученную смесь перемешивают. Смесь инкубируют 10 мин. при температуре 370 С, затем центрифугируют 5 мин., при 1000 об./мин. После центрифугирования клетки помещают на 2 часа в холодильник при температуре 40 С. Клетки аккуратно ресуспендируют и в камере Горяева определяют процент РОК.