Метод определения содержания селена в биологических образцах
Содержание селена в составе биологических проб определяли микрофлуориметрическим методом [5], под руководством старшего научного сотрудника лаборатории пищевой токсикологии и оценки безопасности нанотехнологий ФГБУ «НИИ питания» РАМН, д.с.-х.н.
Голубкиной Н.А. Принцип метода заключается в образовании в слабокислой среде флуоресцирующего комплекса селенистой кислоты с 2,3-диаминонафталином с последующим спектрофлуориметрическим определением. При проведении минерализации образцов сыворотки крови и печени их помещали в пробирки из жаропрочного стекла со шлифом № 14, добавляли по 2 мл смеси 15:8 концентрированной азотной и 52% хлорной кислот и оставляли при комнатной температуре на 16 - 18 часов. Затем пробирки помещали в блок сжигания и осуществляли минерализацию в температурном режиме: 120°С - 1 час, 150°С - 1 час, 200°С - 4 часа. Для удаления следов азотной кислоты блок сжигания охлаждали до 150°С, добавляли к пробам 100 - 200 мкл 33% перекиси водорода и выдерживали при указанной температуре в течение 30 минут. После этого блок сжигания охлаждали до 110°С. Для восстановления шестивалентного селена до Se(IV) к пробам добавляли по 1 мл 6 М соляной кислоты и выдерживали при 110°С в течение 10 минут. По окончании процесса, пробы сразу же вынимали из блока сжигания и добавляли по 1 мл дистиллированной воды, смывая при этом остатки минерализата со стенок пробирок.Готовили раствор 1 мг/мл 2,3-диаминонафталина (ДАН) в 0,1 М соляной кислоте при нагревании до температуры не выше 50°С. Полученный раствор переносили в делительную воронку, трижды экстрагировали 1:3 по объёму гексаном (Х.Ч.), органический слой отбрасывали. Водный слой фильтровали через фильтровальную бумагу. Реактив хранили до проведения анализа не более 7 суток при температуре -20оС в темноте. Все операции с 2,3-ДАН проводили при рассеянном свете. Не допускали использование смазки шлифов пробирок и делительной воронки.
В каждую пробирку с минерализатом добавляли по 0,5 мл раствора тетранатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты и по 1,5 млразбавленного 1:1 водой раствора 25% аммиака. Быстро доводили рН проб до 1,5 - 2,0 по универсальному индикатору до перехода пурпурный - оранжевый цвет, добавляя в случае необходимости по каплям разбавленный аммиак или 0,1 M соляную кислоту. К полученным растворам добавляли по 1,0 мл заранее приготовленного реактива 2,3-диаминонафталина и выдерживали 30 минут в водном термостате в темноте при 50°C. По окончании процесса, пробы вынимали из термостата, охлаждали до комнатной температуры и каждую интенсивно экстрагировали 1 мл гексана в течение 50 - 60 секунд. Определяли величину флуоресценции органического экстракта при λ возбуждения = 376 нм и λ эмиссии = 520 нм. Из определённых значений флуоресценции вычитали значение флуоресценции «холостой» пробы, полученной в тех же условиях без добавления анализируемого биологического материала. Содержание в образцах селена в мкг/кг (мкг/дм3) продукта определяли по стандартному графику, полученному с использованием раствора Na2SeO3известной концентрации. Стандартные образцы подвергали всем тем же процедурам минерализации, что и анализируемые пробы. За окончательный результат принимали среднее арифметическое значение двух определений. Полноту открытия селена проверяли с использованием стандартного образца селена сыворотки крови, аттестованного по международному стандарту микроэлементного состава сыворотки крови человека “Seronorm” (Дания).
3.10
Еще по теме Метод определения содержания селена в биологических образцах:
- Методы отбора субстратов и пробоподготовки биологических образцов используемые в подострых токсикологических экспериментах
- Режимы культивирования при получении дрожжевой биомассы с высоким содержанием селена
- Получение биологических образцов для специального исследования
- Количественное определение содержания суммы флавоноидов в траве полыни эстрагон методом спектрофотометрии
- Хроматографический метод определения метаболитов метанола и формальдегида в биологических средах (в сыворотке крови и моче)
- Визуальный иммунохроматографический экспресс-тест для определения скрытой крови в образцах стула «Colon View Hb и Hb/Hp»
- Определение содержания эндотелина-1.
- Определение содержания НАД^Н.
- Определение содержания адениловых нуклеотидов
- Определение содержания адипокинов.
- Разработка метода синтеза и получения радиоактивно меченных тритием образцов пептида HLDF-6
- 5.1. Определение содержания воды в ткани поясничного межпозвон кового диска.
- Определение содержания пирувата.
- Определение содержания глутатиона.
- Определение содержания лактата.
- Определение содержания НАД и НАДФ.
- Определение содержания катехоламинов.
- Определение содержания малонового диальдегида.