Трансформация
Существует два наиболее часто применяемых способа введения плазмидной ДНК в клетки E.coli: электропорация и трансформация тепловым шоком, иначе называемая химической трансформацией, поскольку в процессе подготовки компетентных клеток их обрабатывают химическими веществами, повышающими эффективность трансформации.
Химический метод является самым простым, не требующим специального оборудования (в случае электропорации необходимы электропоратор и комплект одноразовых кювет). Метод позволяет получить выход трансформантов 105-107 в пересчете на 1 мкг плазмидной ДНК в зависимости от штамма и способа приготовления компетентных клеток. Химические компетентные клетки можно трансформировать неочищенной реакционной смесью после лигирования.
После трансформации бактерии высевают на чашку с агаризованной селективной средой (в данном случае, с ампициллином) и инкубируют в термостате при 37°С 14-16 ч.
Рис. 2.6. Схема вектора для клонирования pQE-30. MCS - полилинкер (от multiple cloning sites)
Еще по теме Трансформация:
- Трансформации энергии.
- Трансформация
- 9.3. Трансформация клеток Escherichia coli.
- Реакция бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ)
- б.Трансформация продуктов разрыва кольца в полупродукты цикла Кребса.
- Естественная и антропогенная трансформация Прикаспийского песчаного очага чумы.
- Патогенез
- Получение бета-ЦД методами контролируемой конверсии
- Генетические аспекты детской онкологии
- 341. Ангиоиммунобластная Т-клеточная лимфома.
- Инактивация генов-супрессоров
- ГЛАВАЗ ВЛИЯНИЕ ПОЛА И ВОЗРАСТА БОЛЬНЫХ МИБЛОДИСПЛАСТИЧЕСКИМ СИНДРОМОМ НА ТЕЧЕНИЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ
- ВЫВОДЫ