9.3. Трансформация клеток Escherichia coli.

100 мкл суспензии компетентных клеток размораживали в ледяной бане, вносили рекомбинантную ДНК, осторожно перемешивали и оставляли в ледяной бане в течение 30 мин. Затем клетки выдерживали в водяной бане при 42°С в течение 90 сек (фаза "теплового шока") и быстро охлаждали в ледяной бане в течение 10 мин.

Затем к суспензии клеток добавляли 400 мкл среды SOC и инкубировали при 37оС в течение одного часа для развития устойчивости к селективному антибиотику. Затем клетки высаживали на чашки Петри с 3.5% триптоз-агаром ("Ferak", Германия), содержащим антибиотик ампицилин в концентрации 75 мкг/мл, IPTG (0.8 мг на поверхность 60 мм чашки) и X-gal (0.8 мг на поверхность 60 мм чашки). После этого клетки инкубировали в течение ночи при 37оС. Бактериальные клоны, несущие рекомбинантные плазмиды, отбирали методом бело-голубой селекции. Отобранные клоны высевали в 4 мл среды LB, содержащей ампицилин в концентрации 50 мкг/мл, инкубировали при 37оС в течение ночи и выделяли из бактериальных клеток рекомбинантные плазмиды.

<< | >>

↑

Источник: ПЕТРЕНКО АНАТОЛИЙ АНАТОЛЬЕВИЧ. Анализ метилирования ДНК при раке шейки матки. 2003

Еще по теме 9.3. Трансформация клеток Escherichia coli.:

- Детская онкология - Кардиоонкология - Лечение онкологических заболеваний - Онкогастроэнтерология - Онконефрология - Паллиативная медицина -

- Акушерство и гинекология - Анатомия - Андрология - Биология - Болезни уха, горла и носа - Валеология - Ветеринария - Внутренние болезни - Военно-полевая медицина - Восстановительная медицина - Гастроэнтерология и гепатология - Гематология - Геронтология, гериатрия - Гигиена и санэпидконтроль - Дерматология - Диетология - Здравоохранение - Иммунология и аллергология - Интенсивная терапия, анестезиология и реанимация - Инфекционные заболевания - Информационные технологии в медицине - История медицины - Кардиология - Клинические методы диагностики - Кожные и венерические болезни - Комплементарная медицина - Лучевая диагностика, лучевая терапия - Маммология - Медицина катастроф - Медицинская паразитология - Медицинская этика - Медицинские приборы - Медицинское право - Наследственные болезни - Неврология и нейрохирургия - Нефрология - Онкология - Организация системы здравоохранения - Оториноларингология - Офтальмология - Патофизиология - Педиатрия - Приборы медицинского назначения - Психиатрия - Психология - Пульмонология - Стоматология - Судебная медицина - Токсикология - Травматология - Фармакология и фармацевтика - Физиология - Фтизиатрия - Хирургия - Эмбриология и гистология - Эпидемиология -