Отбор клонов
22. Найдите на чашке клон, экспрессирующий флуоресцентный белок. При визуальном осмотре такие клоны выглядят слегка окрашенными. Их нужно отметить маркером на обратной стороне чашки.
Отметьте один-два клона без экспрессии (отрицательный контроль).Внимание! Флуоресценцию можно детектировать под флуоресцентным микроскопом с использованием фильтра FITC, с помощью трансиллюминатора или УФ-лампы для детекции
валюты. Некоторые кораллы имеют красные флуоресцентные белки, для детекции которых нужен фильтр Texas Red.
Через 18-20 ч после трансформации не всегда можно наблюдать белок визуально, так как его полное созревание (правильный фолдинг) требует длительного времени (2-3 суток при +4°С). Если флуоресцентные клоны не обнаружены, перенесите чашку в холодильник на +4°С и оставьте на 2-3 дня, после чего повторите отбор клонов.
23. Оцените эффективность клонирования по количеству
рекомбинантных клонов.
На этом выполнение основных методических задач практикума можно считать успешно выполненными.
3.7.
Еще по теме Отбор клонов:
- 2.5.5 Отбор клонов, несущих рекомбинантные плазмиды
- Задача 4. Амплификация, клонирование и экспрессия гена флуоресцентного белка Clavularia, отбор целевых клонов
- 2.9.1. Устройства отбора проб донных отложений и пробоотборные системы для отбора проб воды.
- Профессионально-психологический отбор как элемент профессионального отбора
- 2 Отбор проб молока
- Отбор проб для исследования
- Структура системы профессионально-психологического отбора
- 1 Отбор проб и составление среднего образца
- 2 Отбор и доставка проб молока (секрета)
- 2.2. Средства отбора проб
- 12. Принципы профессионального отбора, этапы
- 4.4 Неблагоприятный отбор
- Отбор целевых рынков
- Методы отбора субстратов и пробоподготовки биологических образцов используемые в подострых токсикологических экспериментах
- 12 Отбор и распределение испытуемых по группам
- Инструментарий для проведения психофизиологического отбора
- Особенности профессионального отбора в предметной области