Методы отбора субстратов и пробоподготовки биологических образцов используемые в подострых токсикологических экспериментах

Отбор органов у лабораторных животных, осуществляли в соответствии с МУ 1.2.2745-10 «Порядок отбора проб для характеристики действия наноматериалов на лабораторных животных». Животные из каждой группы на 29­й или 92-й день за 3 часа до окончания эксперимента, получавшие внутрижелудочно через зонд ОВА производства «Fluka» (Швейцария) в виде 10% раствора, впоследствии подвергались анестезии эфиром, вскрытию брюшной полости и обескровливанию через нижнюю полую вену.

для последующего исследования содержания гемоглобина цианидным методом. После этого у крыс выделяли внутренние органы (печень, почки, селезенку, сердце, семенники, тимус, легкие, надпочечники, головной мозг, внутрибрюшинную жировую клетчатку), определяли их абсолютную и относительную массу. Часть печени и подвздошную кишку, немедленно фиксировали в 10% формалине на натрий-фосфатном буфере рН 7,4 для анализа методом лазерной конфокальной флуоресцентной микроскопии. Печень, почки, селезенку, мозг и жировую ткань перфузировали на холоду стерильным 0,154 М KCl на 0,05 М Трис-НС1 буфере рН 7,4 и готовили гомогенат ткани в этом буфере в отношении 1:4 по массе в гомогенизаторе Поттера с тефлоновым пестиком, для анализа содержания немодифицированного фуллерена С60.

После коагуляции крови сыворотку отделяли центрифугированием при 3000 g. В сыворотке определяли концентрацию ОВА иммуноферментным методом.

У животных, умервщленных декапитацией, отбирали печень на льду и готовили её гомогенат в 0,1 М Трис-HCl буфере рН 7,4 охлаждённом до 0 - +2^оС в соотношении 1:4 по массе, после чего определяли концентрацию небелковых тиолов.

В случаях невозможности проведения немедленного анализа проб после их получения, транспортировку и хранение осуществляли в условиях «холодовой цепи» согласно МУ 1.2.2745-10. Длительное хранение проб осуществляли в условиях «глубокого холода» при температуре -70^оС в морозильной камере.