I. ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Понятие «оппортунистические инфекции», появившееся в медицинской литературе несколько десятилетий назад, приобрело особую значимость в эру пандемии ВИЧ-инфекции и СПИДа.

Пневмоцистоз относится к часто встречающимся ОИ при ВИЧ-инфекции, цитомегаловирусная инфекция (ЦМВИ) также часто возникает у ВИЧ-инфицированнных, при этом она может служить причиной смерти у 20% больных СПИДом лиц (7, 70).

За последние годы доказано важное значение артифициального механизма передачи возбудителей ВИЧ-инфекции и ЦМВИ, который реализуется при переливании крови и ее компонентов, парэнтеральных медицинских лечебных или диагностических вмешательствах, пересадке органов и тканей, а также при инъекционной наркомании. В мире, в том числе и в России, время число инъекционных наркоманов неуклонно увеличивается. В нашей стране оно достигает уже трех миллионов (4,33,35,36). Такие данные настораживают и позволяют ожидать значительного увеличения числа инфицированных как ВИЧ, так и ЦМВ. Известно, что ЦМВ является также причиной внутриутробной и перинатальной патологии, вызывая тяжелые поражения плода (38,55,64).

Эпидемиология пневмоцистоза и ЦМВИ за последние десятилетия претерпела существенные изменения, что важно учитывать при разработке тактики противоэпидемических и профилактических мероприятий, а также системы эпидемиологического надзора за этими инфекциями. Эпидемиологический мониторинг за этими инфекциями невозможен без широкого использования методов их лабораторной диагностики, поскольку клиническая дифференциальная диагностика затруднена из-за сходства симптоматики, а официальный статистический учет заболеваемости пока не осуществляется.

Цель настоящей работы – изучение эпидемиологических особенностей актуальных оппортунистических инфекций – пневмоцистоза и ЦМВИ - на основе применения комплекса современных методов лабораторной диагностики.

Задачи исследования:

1. Разработать адекватные стандартизованные тест-системы на основе иммунофлюоресцентных и иммуноферментных методов для диагностики пневмоцистоза и ЦМВИ;

2.

3. Определить значение этих инфекций в патологии у лиц с иммунодефицитными состояниями разной природы (в том числе – у ВИЧ-инфицированных, больных злокачественными заболеваниями крови);

4. Выявить эпидемиологическую значимость групп риска в отношении инфицирования возбудителями пневмоцистоза и ЦМВИ;

5. На основании результатов комплексных исследований разработать алгоритм лабораторной диагностики пневмоцистоза и ЦМВИ;

6. Выработать тактику противоэпидемических и профилактических мероприятий в отношении пневмоцистоза и ЦМВИ.

Научная новизна:

¨ Разработаны стандартизованные диагностические тест-системы на основе иммунофлюоресцентного и иммуноферментного методов для выявления антител разных классов иммуноглобулинов к возбудителям пневмоцистоза и ЦМВИ, а также их антигенов, доступные и пригодные для использования при массовых обследованиях населения;

¨ Впервые установлено широкое распространение возбудителей пневмоцистоза и ЦМВИ среди детского (71,8%) и взрослого (68,5%) населения разных городов России, в том числе в условиях смешанного инфицирования (42,1%);

¨ Впервые доказано развитие пневмоцистоза не только у ослабленных детей первого года жизни, как это считалось ранее, но и у детей более старшего возраста, а также у подростков и взрослых, что свидетельствует о существенном изменении возрастной структуры заболевших пневмоцистозом;

¨ Обоснована необходимость мониторинга за лицами с иммунодефицитами разной природы (ВИЧ-инфицированные, больные гемобластозами, наркоманы и пр.) с целью своевременного осуществления профилактических и лечебных мероприятий;

¨ Показано значение ЦМВ в формировании акушерской и перинатальной патологии: невынашивание плода, преждевременные роды, мертворождение, а также пневмонии, нарушения слуха и зрения, пороки ЦНС и др. у новорожденных;

¨ Выявлены не известные ранее закономерности распространения явных и скрытых форм пневмоцистоза в детских организованных коллективах закрытого и открытого типа, а также в организованных коллективах взрослых закрытого типа и определены причины, приводящие к возникновению этих заболеваний;

¨ Разработаны алгоритмы лабораторной диагностики пневмоцистоза и ЦМВИ с использованием современных методов (РИФ и ИФА), для их применения в широкой эпидемиологической практике.

Практическая значимость

Впервые разработаны стандартизованные диагностические тест-системы для определения антител к P. carinii классов IgM и IgG методами иммуноферментного анализа, которые подготовлены для экспериментального производства. Указанные диагностикумы выпускаются малыми сериями ЗАО «НИАРМЕДИК+» («Пневмоцисто Скрин»).

Впервые разработаны иммунофлюоресцентные тест-системы для определения антител к P. carinii классов IgM и IgG и пневмоцист в разных стадий развития.

Разработаны новые иммуноферментные тест-системы для определения антител к ЦМВ классов IgG и IgM, а также тест-системы НРИФ для выявления указанных антител, а также суммарных (ранних и поздних) антигенов ЦМВ.

Созданные тест-системы апробированы в клинических и эпидемиологических исследованиях на базе 1-й инфекционной больницы г. Москвы, и отделения СПИД 2-й инфекционной больницы г. Москвы, Гематологического научного центра РАМН, Центров по борьбе со СПИДом гг. Казани и Омска, Центра лабораторной диагностики при Омской государственной медицинской академии.

По результатам наших исследований изданы следующие методические материалы: методические рекомендации «Лабораторная диагностика ЦМВ-заболеваний глаз у детей с помощью реакции бласттрансформации (РБТ) лимфоцитов крови» (утверждены МЗ СССР, 1986г.); «Пневмоцистоз – эпидемиология, клиника, диагностика и лечение» (утверждены Комитетом Здравоохранения Правительства Москвы, 1999г.) и «Цитомегаловирусная инфекция – эпидемиология, профилактика и лечение» (утверждены Комитетом Здравоохранения Правительства г. Москвы, 2001г.), методическое пособие «Диагностика поражений легких при острой дыхательной недостаточности у больных с депрессиями кроветворения» (утверждено Комитетом Здравоохранения при МЗ РФ, 2001г.). Указанные документы подготовлены совместно со специалистами НИИ глазных болезней им. Гельмгольца, Гематологического научного центра РАМН, 1-й клинической инфекционной больницы г. Москвы.

Различные фрагменты диссертации используются при чтении курсов лекций на кафедрах: микробиологии, вирусологии и иммунологии Медицинской академии им.

Получено 3 патента:

- «Штамм цитомегаловируса «Весна» Cytomegalovirus hominis, используемый для диагностики ЦМВИ» № 769889;

- «Способ диагностики воспалительных заболеваний заднего отрезка глаз у детей с подозрением на ретинобластому» № 2077726;

- «Способ выделения пневмоцист» № 2186390.

Получено 2 авторских свидетельства: «Способ диагностики ЦМВ-хориоретинитов и увеитов у детей» № 971317 и «Способ получения биомассы P. carinii» № 168599.

Апробация работы

Диссертации обсуждена 8 апреля 2002г. на совместной научной конференции отделов эпидемиологии, медицинской микробиологии, природноочаговых инфекций, иммунологии ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН.

Материалы диссертации доложены на 24 Международных и Всероссийских симпозиумах, конгрессах конференциях: Х Международная конференция по СПИДу (Япония, Йокогама, 1994г.), III Международная конференция по СПИДу в Азии (Тайланд, 1995г.), 3-я и 4-я Международные конференции «СПИД, рак и родственные проблемы» (Санкт-Петербург, 1995г., 1996г.), ХI Международная конференция по СПИДу (Канада, Ванкувер, 1996г.), Х Международный конгресс по вирусологии (Израиль, Иерусалим, 1996г.), 8-й Национальный конгресс по болезням органов дыхания. Европейская респираторная школа (Москва, 1998г.), VII Научная конференция Европейского общества химиотерапии инфекционных болезней (Италия, Сорренто, 2000г.), Всероссийская научная конференция «Современные технологии диагностики и терапии инфекционных болезней» (Санкт-Петербург, 1999г.), Всероссийская научно-практическая конференция «Внутриутробные инфекции плода и новорожденных» (Саратов, 2000г.) и др.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 58 работ, в том числе, глава «Цитомегаловирусная инфекция» в руководстве для врачей «Частная эпидемиология» (2002 г.).

Структура и объем работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, изложения результатов собственных исследований (4 главы), заключения, выводов и библиографического указателя, включающего ссылки на 73 отечественных и 287 иностранных работ. Работа изложена на … страницах машинописного текста, иллюстрирована 14 таблицами и 12 рисунками и содержит 5 приложений.