2.2.1. Длительность, пути введения и дозы препаратов

Минимальная длительность введения лекарственного средства в хроническом токсикологическом эксперименте должна определенным образом соотноситься с курсом применения в клинической практике.

Несмотря на стремление к гармонизации токсикологических иссле­дований, единых требований к необходимой продолжительности введе­ния лекарственных средств экспериментальным животным нет. Так, в европейских странах максимальная продолжительность введения фар­мацевтического препарата составляет 6 мес., в США - 12-18 мес., в Японии - 12 мес. Однако вопрос оптимальной длительности введения нового фармакологического вещества продолжает оставаться не вполне решенным. В этом плане определенный интерес представляет работа Beir [60], в которой автор сравнивал результаты, полученные при вве­дении веществ 46 крысам в течение 1 и 6 мес. Нежелательные побочные эффекты были выявлены в 44 случаях уже в течение 1-го месяца введе­ния препаратов и только в 2 случаях - после 6 мес. применения. По­скольку в хроническом токсикологическом эксперименте применяемые дозы значительно превышают терапевтические, представляется прием­лемой максимальная длительность введения препарата - 6 мес., хотя в случае необходимости этот срок может быть увеличен, например, при изучении противотуберкулезных препаратов [106, 279].

Нецелесообразно вводить препарат более 6 мес. мелким лабора­торным животным (мышам, крысам), поскольку продолжительность их жизни невелика (2-3 года), и животные будут находится уже в другом возрастном периоде, а возраст может иметь самостоятельное значение для реакции организма на ксенобиотик, что может осложнить оценку безвредности изучаемого вещества. В нашей стране в настоящее время рекомендуются следующие сроки введения лекарственных средств экс­периментальным животным в зависимости от рекомендуемой длитель­ности применения в клинике (табл. 6).

Таблица 6 - Продолжительность введения фармакологического вещест­ва экспериментальным животным в зависимости от длительности его применения у человека__________

Длительность применения препарата у человека

Длительность введения фармакологического вещества животным

Однократное введение 2—6 дней 7—14 дней 15-30 дней 1—6 мес

5—7 дней 14 дней

I мес 2—4 мес

6— 12 мес

После прекращения введения фармакологического вещества часть экспериментальных животных в каждой группе должна быть подверг­нута эвтаназии, за остальными проводят наблюдение в течение 2-4 нед

после окончания введения изучаемого препарата.

Путь введения лекарственного препарата экспериментальным жи­вотным должен соответствовать применению препарата в клинике. Од­нако при изучении токсичности нового фармакологического вещества на стадии доклинического изучения желательно использовать несколь­ко путей введения, чтобы иметь более полное представление о его ток­сичности.

Некоторые технические трудности представляет внутривенное вве­дение препарата мелким лабораторным животным в хроническом ток­сикологическом эксперименте. В ряде случаев внутривенный путь вве­дения может быть заменен на внутрибрюшинный, однако в/в препарат должен вводиться максимально возможный срок. Наш многолетний опыт показывает, что при определенном навыке в/в лекарственный пре­парат можно вводить мышам и крысам до 1 мес. ежедневно - конечно, при условии отсутствия местного действия изучаемого вещества.

При необходимости изучения токсичности лекарственных форм пре­паратов в виде суппозиториев на мелких лабораторных животных ин- травагинально или per rectum следует иметь специально при­готовленные маленькие суппозитории, содержащие действующее веще­ство в соответствующей дозировке и все остальные ингредиенты, зало­женные в нормативной документации на данное лекарственное средст­во.

Важнейшим при проведении хронических токсикологических иссле­дований является выбор дозы препарата, особенно в хронических экс­периментах. Изучение токсичности лекарственного препарата в не­скольких дозах в определенной степени является гарантией прогноза нежелательных эффектов, которые могут проявиться у пациентов в клинике.

Многолетний опыт работы по оценке безвредности новых ле­карственных препаратов дает основание рекомендовать изучение хро­нической токсичности нового вещества не менее чем в 3 дозах. Это со­гласуется и с зарубежными рекомендациями.

Максимальная доза фармакологического вещества должна обя­зательно вызывать симптомы интоксикации, с тем, чтобы можно было выявить органы-мишени или системы-мишени, наиболее чувстви­тельные к изучаемому веществу.

Минимальная доза лекарственного средства может быть близкой к терапевтической дозе для животных или человека. Однако, учитывая различную скорость метаболизма вещества у человека и мелких лабора­торных животных, меньшую дозу препарата следует устанавливать с учетом определенного коэффициента (см. гл. 5). Третья доза (промежу­точная) выбирается таким образом, чтобы можно было дать ответ о ве­личине терапевтической широты изучаемого вещества. Использование препарата в 3 дозах ни в коей мере не ограничивает изучение его ток­сичности в значительно большем диапазоне доз.

Большинство исследователей работают с дозами (выражающимися в мг/кг) при насильственном введении препарата экспериментальным животным. Однако некоторые авторы рекомендуют рассчитывать коли­чество лекарственного препарата на поверхность тела - как один из способов определения равноэффективных доз для животного и челове­ка.

При введении лекарственного средства с кормом или водой необ­ходимо учитывать определенные коэффициенты. Так, Kolodziejczyk и соавт. предлагают для крыс линии Wistar применять следующие коэф­фициенты: в острых опытах для корма - 10,5, для воды - 7,7; в подост­рых опытах - 13,1 и 8,9; в хронических опытах - 16,1 и 12 соответст­венно.

Ориентиром при выборе доз для хронического токсикологического изучения новых лекарственных средств может быть величина LD₅₀ при данном пути введения, а также способность к кумуляции, которая мо­жет быть связана с накоплением вещества в организме (материальная кумуляция) или "накоплением" патологических изменений, вызывае­мых данным веществом (функциональная кумуляция) [36].

Изучение динамики накопления в крови и тканях, а также скорости его выведения из организма позволяет прогнозировать возможность ма­териальной кумуляции. Ценным показателем при этом является опреде­ление фармакокинетического профиля препарата, в частности, периода полувыведения (Т₅₀), который позволяет количественно оценить воз­можность накопления вещества при любом режиме его введения в ор­ганизм.

Одной из возможностей определения функциональной кумуляции после однократного введения вещества может служить метод двойного учета смертельных исходов - определение LD₅₀ по результатам l-ro и 30-го дней наблюдения за животными. Чем меньше времени требуется для развития смертельного исхода, тем большей кумуляцией обладает вещество [171].

В А.Чернов в своих работах [164] предлагал оценивать кумуля-

тивный эффект не по летальному исходу, а по величине максимально переносимых доз, рассчитывая индекс кумуляции по формуле:

100 (МПД, — МПД_П)

Индекс кумуляции = ------------------------------ Г77Т7Г^-;--- 77------ ,

МПД_П (n—1)

где МПД, и МПД₂ - максимально переносимые дозы соответственно при 1-кратном и n-кратном введении; п - число введений.

Максимально переносимой дозой считается доза, введение которой не приводит к снижению массы животных в течение 10 дней наблюде­ния после введения. Существуют и другие формулы, по которым вы­числяют индекс кумуляции [143].

Таким образом, на основании величин LD₅₀, индекса кумуляции и дозы, рекомендованной для клинического изучения, подбираются дозы для хронического токсикологического эксперимента.

При изучении хронической токсичности препарат необходимо вво­дить ежедневно не менее 1 раза в сутки (если не предусмотрен другой режим для решения тех или иных задач).

Определенное значение имеет время суток введения лекарственного препарата, которое необходимо указывать при описании токси­кологических исследований. Вещества следует вводить в одно и то же время в течение всего хронического эксперимента.

Оценка влияния фармакологического вещества на состояние гомео­стаза экспериментальных животных проводится в течение всего экспе­римента. Следует отметить, что частота и время исследований устанав­ливаются индивидуально для каждого препарата, однако при этом сле­дует обращать внимание на сезон, время суток и другие моменты, ха­рактеризующие биологические ритмы животных при проведении ис­следований (см. гл. 4). В хронических токсикологических эксперимен­тах лабораторные и другие показатели гомеостаза исследуют у экспе­риментальных животных до введения препарата и в конце эксперимен­та, например, через 6 мес. от начала введения препарата, когда наступи­ло другое время года и подопытные животные находятся в другом воз­растном периоде. Это особенно важно при изучении хронической ток­сичности лекарственных препаратов на мелких лабораторных живот­ных (мышах и крысах), для которых 6 мес. составляют примерно 1/4 продолжительности жизни [181].

2.2.2.