2.2 Исследования на сальмонеллы

2.2.1 Метод последовательного обогащения. Навеску исследуемого материала 25-200 г (50 г от 10 и менее, 100 г от 11 до 100 и 200 г от 101 и выше упаковочных единиц) измельчают в стерильной фарфоровой ступке и вносят в колбу, содержащую среду предварительного обогащения (пептонная вода, МПБ с содержанием 5% маннита) при соотношении материала и среды 1:5.

Содержимое колбы тщательно перемешивают и ставят в термостат при температуре 37°С. Через 16-18 часов производят посевы на бактериологические чашки с твердыми дифференциально-диагностическими средами: висмут-сульфит агар, средой Плоскирева или Левина (по две чашки) и на две (по выбору) основные среды обогащения (селенитовый бульон, магниевую среду, среды Киллиана, Мюллера, Кауфмана) в соотношении 1:5. Лучшими являются селенитовый бульон и магниевая среда.

После 16-18-часового выдерживания в термостате при 37°С из обогатительных сред бактериологической петлей производят вторично посевы на чашки с твердыми дифференциально-диагностическими средами, которые помещают в термостат при 37°С. Засеянные чашки просматривают через 16, 24, 48 часов.

2.2.1.1 На висмут-сульфит агаре S. typhy и S. paratyphy растут в виде мелких, нежных, серовато-зеленых колоний с черным центром; S. choleraesuis - в виде зеленых колоний. Колонии почти всех других сальмонелл значительно крупнее, темно-коричневого цвета с металлическим блеском, окруженные светлым ореолом, цвет участка среды под колонией черный.

2.2.1.2 На среде Плоскирева сальмонеллы растут в виде прозрачных или нежно-розовых колоний, на среде Левина - в виде прозрачных, бледных, нежно-розовых или розовато-фиолетовых колоний.

2.2.2 В случае обнаружения колоний, подозрительных на сальмонеллы, 3-5 колоний с каждой чашки. Изучаемые колонии снимают и делают мазки, окрашивают по Граму. Сальмонеллы являются грамотрицательными палочками, не образуют спор и капсул.

2.2.3 Затем пересевают на МПБ, который помещают в термостат при 37°С на 4 часа (до помутнения), затем засевают на комбинированную среду Рассела или на двухсахарный (лактоза, глюкоза) агар, а лучше на трехсахарный (лактоза, глюкоза, сахарозам) "скошенный столбик" с мочевиной.

2.2.4 Высев делают на короткий пестрый ряд, включающий скошенный агар и среды Гисса с глюкозой, лактозой, и сахарозой и МПА, а также на бульон Хоттингера для определения индола и сероводорода (в этих целях под пробку пробирки с бульоном вкладывают специальные индикаторные бумажки).

2.2.4.1 Индол определяют путем наслоения на среду реактива Эрлиха (0,5мл), при этом появление красного кольца на границе жидкостей через 2-5 минут свидетельствует о положительном результате.

2.2.5 Для определения подвижности культуры производят посев уколом в полужидкий агар (0,3-0,5%). Одновременно может быть проведена предварительная реакция агглютинации с сальмонеллезными сыворотками.

На среду Рассела и "скошенный столбик" посевы делают сначала штрихом на скошенной поверхности, а затем уколом в глубину столбика.

2.2.6 При разложении лактозы косая поверхность окрашивается в синий цвет (при индикаторе ВР). При разложении одной глюкозы окрашивается только столбик среды и происходит разрыв агара со скоплением в нем пузырьков газа. При разложении мочевины в "скошенном столбике" окраска среды меняется на оранжевую при индикаторе ВР и на коричнево-фиолетовую при индикаторе тимоловый синий в сочетании с индикатором Андраде. Посевы выдерживают в термостате при температуре 37°С 16-18 часов.

Культуры, ферментирующие лактозу, глюкозу и сахарозу с образованием газа и расщепляющие мочевину, отбрасывают. Культуры, не ферментирующие лактозу и сахарозу и не расщепляющие мочевину, подлежат дальнейшему исследованию. Изучают морфологию культуры в мазке, окрашенном по Граму, и подвижность (в висячей или раздавленной капле, в полужидком агаре).

2.2.7 Культуры грамотрицательных подвижных палочек, ферментирующие глюкозу с образованием газа, не ферментирующие лактозу и сахарозу, не разлагающие мочевину и не образующие индол, подвергаются серологическому исследованию в реакции агглютинации на предметном стекле с набором агглютинирующих сывороток.

2.2.7.1 Для реакции агглютинации используют культуры, выращенные на среде Рассела или на двухсахарном или трехсахарном агаре. При этом для реакции агглютинации с О-сыворотками культуру следует брать из верхней части скошенного агара, а для агглютинации с Н-сыворотками - из самой нижней части (конденсационной воды), где микробы наиболее подвижны.

Исследование культуры начинают реакцией агглютинации с поливалентной адсорбирозанной 0-сывороткой основных серологических групп А, В, С, О, Е.

На предметное стекло наносят каплю, сыворотки и культуры, тщательно смешивают и в течение 2 мин. наблюдают склеивание (агглютинацию) частиц. Культуры, дающие положительную реакцию агглютинации с поливалентной сывороткой, также проверяют с монорецепторными агглютинирующими сыворотками. Сначала с помощью монорецепторных 0-сывороток устанавливают принадлежность культур к той или иной серологической группе, остановив серологическую группу, к которой отнесена данная культура, последнюю проверяют монорецепторными Н-сыворотками сначала первой фазы, а потом второй, определяя, таким образом, серологический тип бактерий в соответствии со схемой Кауфмана - Увита.