Получение продуктов из клеток животных
В культурах клеток животных, инфицированных вирусом с целью его получения в больших ко
личествах, выход последнего в культуральную среду происходит в результате лизиса клеток.
Лизис клеток наступает после того, как репродукция вируса в клетках пройдет все необходимые фазы: адсорбция, проникновение вируса-инокулята в клетку, синтез компонентов вируса, сборка вирусных частиц. В зависимости от требуемого содержания вируса в культуральной жидкости ее подвергают концентрированию до 250 раз или не концентрируют, а в некоторых случаях даже разбавляют. Исходя из свойств используемого вируса, его инактивируют чаще всего формальдегидом и другими инактивирующими агентами, получая «убитые» вакцины. С разбавлением и без инактивации готовят так называемые аттенуированные (ослабленные) вирусные вакцины. Для их приготовления используют вирусы-инокуляты, которые генетически модифицированы мутагенным агентом или длительным пассированием в культуре клеток таким образом, что их антигенные свойсва сохранены, а патогенные снижены. Вирус в этих живых вакцинах в отличии от инактивированных («убитых») вакцин сохраняет способность размножаться в клетках вакцинированного организма, поэтому доза аттенуированной вакцины может быть снижена. Из многих известных культуральных вакцин для человека и животных только небольшая часть (полиомиелитная, антирабическая и ящурная) выпускаются как инактивированные, а остальные — как живые аттенуированные.Культуральные вирусные суспензии представляют собой сложные системы, содержащие
крупные частицы (клетки) размером в несколько мкм, средние частицы (вирусы) размером в несколько десятков нм и мелкие дисперсные частицы (белки и другие вещества) размером менее десяти нм. Для концентрирования вирусов используют ультрацентрифуги, а в последнее время имеется тенденция применения для целей концентрирования и очистки вирусных антигенов мембранной технологии в комплексе с хроматографическими методами, например, ядерные фильтры, пористые кремнеземы для гель-фильтрации, ионообменники.
Как установлено, мембранные и хроматографические методы в сравнении с ультрацентрифугированием обеспечивают высокую производительность процесса, удаляют даже следы белков сыворотки, используемой для культивирования клеток, минимизируют потери целевых продуктов. Для улучшения качества вакцинных препаратов применяют сорбцию иммунизирующих антигенов на носителях-адъювантах, из которых наибольшее распространение имеет гель гидроокиси алюминия. При этом стимулируется иммунный отклик, увеличивается срок годности препарата.Некоторые вакцины подвергают сушке, в основном сублимацией в упаковочной таре, которую после высушивания герметизируют. При сушке происходит инактивация некоторой части вируса, но при большой его концентрации это не столь драматично, зато значительно увеличивается срок годности препарата при хранении. Режимы сублимационной сушки индивидуальны для каждого препарата, но имеют много общего не только с другими вирусными, но и микробными препаратами.
Другие продукты биотехнологии клеток животных, кроме вакцин из цельных вирусов, требуют еще более высокой очистки. К ним относятся диагностические препараты из высокоочищенных антигенов культуральных вирусов для иммуноферментного анализа с целью определения вирусов в биологических жидкостях, диагностики вирусных заболеваний. Концентрирование вируса осуществляют методом ультрафильтрации (в 10-30 раз), с помощью поливинилпирролидона, полиэтиленгликоля, ультрацентрифугированием при 30000 g в градиенте плотности сахарозы и ионообменной хроматографией через ДЭАЭ-целлюлозу.
Моноклональные антитела очищают от культуральной жидкости. Сначала их концентрируют примерно в 50 раз ультрафильтрацией, затем очищают такими методами хроматографии, как адсорбция, ионный обмен, аффинная хроматография. Аффинная хроматография на протеин А-сефарозе позволяет достигать высокой степени чистоты (более 95%) при работе с большими килограммовыми количествами моноклональных антител. Очистка облегчается при использовании бессыворо- точных сред для клеток. Более высокая очистка требуется для препаратов, используемых для лечения людей, чем для анализов in vitro. Для достижения наивысшей степени очистки требуется применить последовательно ряд методов очистки с гельэлектрофорезом на заключительном этапе.
Интерферон может быть очищен в 1000 раз с помощью моноклональных антител против него, посаженных на инертные частицы, такие как сефароза в колонке.
2.4.2.
Еще по теме Получение продуктов из клеток животных:
- Продукты на основе клеток животных
- Продукты технологии культур клеток и тканей животных и растений
- Получение продуктов из клеток растений
- Технологическая схема производства продуктов на основе культур клеток животных и растений
- Получение готовых продуктов
- 11 2. Продукты на основе клеток растений
- Среда для клеток животных
- Получение половых продуктов.
- Культивирование клеток тканей животных и растений
- Переработка денуклеинизированной микробной биомассы с получением продуктов белковой природы
- Биореакторы для клеток животных и растений
- Основные типы культур клеток животных и растений
- 9.2. Получение компетентных клеток Escherichia coli.
- Обеспечение асептических условий в технологии культур клеток животных и растений
- Технология получения препаратов БАВ из растений, органов и тканей животных
- Влияние аутогемохимиотерапии на синтетическую активность клеток крови, костного мозга и саркомы 45 животных-опухоленосителей
- Переработка обезжиренного микробного сырья с получением продуктов полинуклеотидной природы
- Биотехнология культур клеток и тканей животных и растений
- Переработка микробной биомассы с получением продуктов ЛИПИДНОЙ природы
- Гидролиз микробных полинуклеотидов (РНК) с получением продуктов технического и пищевого назначения и субстанций для синтеза лекарственных средств