6 Исследование на наличие кишечной палочки

6.1 Санитарно-показательными бактериями считают все разновидности кишечной палочки, способные ферментировать жидкую среду с глюкозой и маннитом с выделением кислоты и газа в течение 24 часов при температуре 43-44°С.

Коли-титр — наименьший объем или вес исследуемого материала, выраженный в мл или г, в котором обнаружена одна кишечная палочка.

Коли-индекс — число бактерий кишечной палочки в 1 мл спермы или в 1 г сухого вещества.

Коли-титр можно перевести в коли-индекс и наоборот. Для перевода коли-титра в коли-индекс единицу делят на объем, выражающий коли-титр. Например, установлен коли-титр, равный 0,01 мл (разведение 1:100), следовательно, коли-индекс будет = = 100, то есть в 1 мл содержится 100 кишечных палочек.

Для перевода коли-индекса в коли-титр необходимо единицу разделить на число, выражающее коли-индекс. Например, коли-индекс равен 100. В этом случае коли-титр = = 0,01 мл.

6.2 Коли-титр можно определять: 1) методом бродильных проб, 2) методом «прямого посева» и 3) методом мембранных фильтров.

Наиболее приемлем в практических условиях метод бродильных проб. С этой-щелью убывающие объемы спермы высевают на специальные среды. При этом допускают, что попадание 1 бактерии вызывает видимые изменения в среде.

В ветеринарной практике широко апробированы среда КОДА и Булира. На 1 л МПБ добавляют 2,5 г маннита, рН среды доводят до 7,0-7,1, автоклавируют или кипятят 15 минут; Добавляют насыщенный водный; раствор нейтральрота до окрашивания среды в вишнево-красный цвет.

6.2.1 На среду Булира высевают по 1 мл спермы, разведенной 1:10; 1:100 и 1:1000. Если в пробе устанавливают одновременно коли-титр и степень бактериальной загрязненности, то высев производят одновременно одной пипеткой. Пробирки с посевами инкубируют при температуре 43-44°С в течение 24 часов. Температура.43-44^оС не задерживает роста кишечной палочки, но подавляет размножение другой микрофлоры.

6.2.2 На среде КОДА посевы инкубируют при температуре 37°С в течение 24 часов.

6.3 Учет результатов.

6.3.1 При отсутствии помутнения среды Булира и газообразования реакцию считают отрицательной.

6.3.1.1 Изменение цвета среды (пожелтение), помутнение и газообразование (пузырек в газовке) указывают на размножение в среде микробов группы кишечной палочки (кишечная палочка, размножаясь, продуцирует кислоту и газ).

6.3.1.2 Для подтверждения того, что брожение манннта вызвано именно кишечной палочкой, проводят индентификацию культуры.

6.3.1.3 Из пробирок, содержащих газ в поплавке, делают высев петлей в чашки со средой Эндо. Для получения изолированных колоний засеваемый материал наносят на поверхность среды в виде густо пересекающихся штрихов или втирают в среду шпателем. Выращивают при температуре 37°С в течение 24 часов. Осматривают чашки и отмечают колонии, характерные для группы кишечной палочки (красные колонии с металлическим блеском и без него, розовые колонии, бесцветные и бесцветные с розовым центром). При отсутствий колоний, характерных для кишечной палочки, результат считают отрицательным, исследования прекращают. При установлении микроорганизмов с признаками, типичными для бактерий из группы кишечной палочки, из 2-3 колоний готовят мазки, окрашивают их по Грамму и микроскопируют. Наличие грамотрицательных, палочек, без спор, морфологически сходных с кишечной палочкой указывает на возможность наличия кишечной палочки. Из колоний, характерных для кишечной палочки, высевают в пробирки со средой Булира (вторая бродильная проба) и выращивают 24 часа при температуре 43-44^оС. Помутнение среды без газообразования – отрицательный результат, изменение цвета, помутнение среды и газообразование — положительный.

За титр кишечной палочки принимают тот; объем материала, который вызвал брожение в пробирке с наибольшим разведением.

6.3.2 При отсутствии изменения цвета среды КОДА и газообразования реакцию считают отрицательной.

6.3.2.1 Изменение цвета среды КОДА с помутнением их и образованием газа свидетельствует о наличии роста кишечной палочки.