Очистка рекомбинантного белка (задача 5)
На практике получение штамма E.co/i, экспрессирующего гетерологичный белковый продукт, позволяет начать следующий этап исследований, связанный с изучением свойств рекомбинантного белка и доказательством его функции.
Для этого необходимо провести целый ряд исследований по оптимизации экспрессии белка, способу его очистки, хранения и т.п.В задачи практикума не входит обучение этой группе методов, однако, как завершающий этап всей работы, рекомендуется провести выделение рекомбинантного белка с помощью металлаффинной хроматографии (с помощью аналитической колонки) и показательный электрофорез в полиакриламидном геле (ПААГ).
Для получения рекомбинантного белка выполняются следующие действия:
• культивация биомассы и индукция промотора;
• выделение рекомбинантнного белка из биомассы.
Отобранные рекомбинантные клоны наращивают в жидкой
среде при интенсивном перемешивании (230 - 250 об/мин). Биомасса может быть использована для выделения плазмидной ДНК (с целью сохранения клона и дальнейшего анализа), а также рекомбинантного белка.
2.6.1.
Еще по теме Очистка рекомбинантного белка (задача 5):
- Выделение рекомбинантнного белка из биомассы
- Задача 5. Очистка и визуализация GFP
- Задача 3. Амплификация 3'-концевого участка гена флуоресцентного белка из кораллового полипа Clavularia (3'- RACE)
- Задача 4. Амплификация, клонирование и экспрессия гена флуоресцентного белка Clavularia, отбор целевых клонов
- Амплификация полной кодирующей последовательности целевого гена. Клонирование и экспрессия гена флуоресцентного белка в бактериальной системе экспрессии (задача 4)
- 2.5.5 Отбор клонов, несущих рекомбинантные плазмиды
- 4. Предстерилизационная очистка эндоскопов
- 2. Очистка эндоскопов перед дезинфекцией
- Очистка гониоскопа.
- Применение аллергена туберкулезного рекомбинантного для выявления и диагностики туберкулеза у детей с ВИЧ-инфекцией
- I. Рекомбинантный активировнный белок C (Recombinant activated protein C - rhAPC)
- Очистка и стерилизация воздуха
- Мембранные методы очистки и концентрирования жидких препаратов