Определение содержания НАД и НАДФ.

Для извлечения НАД и НАДФ во взвеси эритроцитов, лимфоцитов и плазмы, исследуемый материал замораживали в жидком азоте и измельчали. После чего НАД и НАДФ экстрагировали по методу Bessho et al, (1989) с добавлением 4-х кратного объема 0,6 М раствора перхлорной кислоты.

Затем взвесь центрифугировали при температуре 0^о С в течение 10 минут при 3000 об/мин. После центрифугирования безбелковый экстракт смешивали с 0,2 мл 1 М раствора К2НРО4, а затем добавляли раствор КОН до нейтрализации. Все операции проводились на ледяной бане. После выпадения в осадок КС1О₄ надосадочную жидкость переносили в две чистые пробирки и определяли концентрации НАД и НАДФ ферментативным путем, измеряя экстинкции Е образцов на спектрофотометре Cary -118 (США) при длине волны 340 нм. Для определения НАД в супернатант добавляли 0,025 мл раствора 1% алкогольдегидрогеназы и для определения

НАДФ - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы. Содержание НАД и НАДФ вычисляли по формуле: С = Е/6,22, где 6,22 - молярный коэффициент экстинкции.

С целью исключения погрешности измерений белок осадка, оставшийся после центрифугирования, растворяли в 0,1 N растворе NaOHи определяли содержание белка по Лоури (1971).

2.1.2.19.

<< | >>

↑

Источник: ИНГА МАМУЧИШВИЛИ. ВЗАИМОСВЯЗЬ СТРЕСС-ИНДУЦИРУЕМЫХ НАРУШЕНИЙ В НЕЙРОГУМОРАЛЬНОЙ СИСТЕМЕ И СИСТЕМЕ ЭНЕРГООБЕСПЕЧЕНИЯ У ПОДРОСТКОВ. ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук. Тбилиси - 2006. 2006

Скачать оригинал источника

Еще по теме Определение содержания НАД и НАДФ.:

- Основы педиатрии -

- Акушерство и гинекология - Анатомия - Андрология - Биология - Болезни уха, горла и носа - Валеология - Ветеринария - Внутренние болезни - Военно-полевая медицина - Восстановительная медицина - Гастроэнтерология и гепатология - Гематология - Геронтология, гериатрия - Гигиена и санэпидконтроль - Дерматология - Диетология - Здравоохранение - Иммунология и аллергология - Интенсивная терапия, анестезиология и реанимация - Инфекционные заболевания - Информационные технологии в медицине - История медицины - Кардиология - Клинические методы диагностики - Кожные и венерические болезни - Комплементарная медицина - Лучевая диагностика, лучевая терапия - Маммология - Медицина катастроф - Медицинская паразитология - Медицинская этика - Медицинские приборы - Медицинское право - Наследственные болезни - Неврология и нейрохирургия - Нефрология - Онкология - Организация системы здравоохранения - Оториноларингология - Офтальмология - Патофизиология - Педиатрия - Приборы медицинского назначения - Психиатрия - Психология - Пульмонология - Стоматология - Судебная медицина - Токсикология - Травматология - Фармакология и фармацевтика - Физиология - Фтизиатрия - Хирургия - Эмбриология и гистология - Эпидемиология -