Хроматографический метод определения метаболитов метанола и формальдегида в биологических средах (в сыворотке крови и моче)

C целью подтверждения ведущего значения химического фактора в комплексной оценке воздействия его на генеративную функцию работниц было определено содержание микропримесей метаболитов метанола и формальдегида в биологических средах (сыворотка крови, моча), забор материала для хроматографического исследования производился 2 раза: в начале и конце рабочей смены у всех 168 женщин с бесплодием (116 основная и 52 контрольная группа).

Работы выполнялись на отечественном хроматографе «Цвет-1» снабженном высокочувствительным пламенно - ионизационным детектором (ПИД) и приспособлениями для концентрирования микропримесей и их идентификация.

Разделение газов производилось на насадочной колонке из нержавеющей стали длиной 200 см. и внутренним диаметром 2 мм, наполненной сорбентом - 10% диглицерином на диатомитовом носителе (фракция 0,25 мм), прокаленном при температуре 1200°С. Насадочная колонка помещалась в термостате с температурой 90°С при температуре испарителя 200°С. В качестве газоносителя применялся аргон. Поток газоносителя, необходимый для продвижения по колонке разделяемой смеси, поступает из баллона, формируется блоком подготовки газа, который обеспечивает регулирование, очистку и стабилизацию потока. Скорость потока через колонку 30 мл/мин. Давление газоносителя на входе в колонку - 0,6 - 0,8 мм рт. ст. Расход газоносителя - 17 мл/мин. Соотношение водорода и воздуха, необходимых для горения пламени, устанавливалось в соотношении 1/10. Для работы было выбрано оптимальное пламя при давлении (P) воздуха 0,8 атм. P водорода - 0,4 атм., P аргона - 0,5 атм. Электропотенциометр (ЭПМ) - со шкалой 10 мВ, скорость протяжки диаграммной ленты - 360 мм/ч.

Для определении токсических веществ в биологических средах (сыворотка крови, моча) жидкую пробу анализируемой смеси вводили микрошприцем МШ-10 через резиновое уплотнитнение в испаритель, где она быстро испаряется, пары подхватываются потоком газоносителя и поступают в колонку. За счет различной растворимости компонентов в пленке неподвижной фазы, нанесенной на инертном носителе, наполняющем колонку, они перемещаются по колонке с различной скоростью.

Рисунок 1. Схема записи хроматограммы газовой смеси: I - основная линия, 2 -основание пика, h - высота пика, S - площадь пика.

Количественный расчет исследуемых веществ в биоматериалах мы проводили методом внешнего стандарта. Для этого готовили смесь с известным содержанием в воде определенного компонента; 2 мл смеси вводили в хроматограф и по хроматограмме рассчитывали площадь пика внешнего стандарта. Количество исследуемого вещества определяли путем сравнения площади пика анализируемого вещества и площади пика внешнего стандарта по формуле:

Qj _ Sl ^Х CT

C

Ост-

Примечание: Ci - количество анализируемого вещества, масса, %;

Si - площадь пика анализируемого вещества, мм²:

Сет - количество вещества, взятого в качестве стандарта, %;

Sct - площадь пика стандартного вещества, мм²;

Проведенные исследования позволили получить конкретные хроматографические записи для анализа. Идентификация компонентов в анализируемых пробах производилась путем сравнения времени удерживания известного соединения на одной и той же колонке при идентичных условиях.

Выявленные на хроматограммах пики по времени удерживания совпадали с подобными пиками соответствующих компонентов в искусственной смеси.

2.4