3.2.5 Получение перитонеальных макрофагов и культивирование их in vitro
В работе использовали макрофаги, полученные только от интактных мышей после дислокации шейных позвонков. Резидентные макрофаги получали путем перитонеального лаважа по 5 мл на мышь среды RPMI-1640 («РАА», Австрия) с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС) («Биолот», Россия) и
160 мкг/мл гентамицина (Mapichem AG, Швейцария).
Клетки собирали на льду, пулировали, отмывали центрифугированием и ресуспендировали в указанной выше среде до концентрации 1х106/мл, затем инкубировали в планшетах или слайд-камерах (Chamber Slides, LabTek II, США) в течение 18 ч при 37
С в СО2- инкубаторе (Sanyo, Япония) с 5% содержанием СО2. Для изучения функциональной активности макрофагов, неприлипшие клетки удаляли, а оставшиеся инкубировали при различных условиях. В эксперименте использовали интактные макрофаги и макрофаги, обработанные липополисахаридом (ЛПС) (E.coli 055:B5, Sigma, США) в дозе 1 мкг/мл или ламинарином (Sigma, США) в дозе 1 мг/мл. Ламинарин представляет собой β(1-3)-β(1-6)-гликан – линейный полисахарид, обнаруженный в бурых водорослях Laminaria digitata и имеющийсходную химическую структуру с полисахаридами грибов. Соотношение гликанов β(1-3):β(1-6) в ламинарине - 3:1 [62].
Жизнеспособность макрофагов после периода культивирования и окрашивания 0,4% трипановым синим (Sigma США) составляла 95%.
В эксперименте использовали штаммы C. neoformans, опсонизированные
10% мышиной сывороткой в течение 1 часа при 370 С и грибы C. neoformans без опсонизации. Свежую мышиную сыворотку получали из крови животных, используемых в день эксперимента. Сыворотку крови тщательно отделяли от сгустка, затем центрифугировали (160g, 10 мин).
Еще по теме 3.2.5 Получение перитонеальных макрофагов и культивирование их in vitro:
- ГЛАВА 5 Взаимодействие штаммов C. neoformans разной вирулентности с перитонеальными макрофагами in vitro
- 3.2.9 Определение цитотоксической активности перитонеальных макрофагов
- 5.2.1 Влияние штаммов C. neoformans разной вирулентности на способность макрофагов к продукции супероксид анионов in vitro
- 5.4 Оценка спектра цитокинов, вырабатываемых макрофагами, при взаимодействии с криптококками in vitro
- 5.2 Влияние штаммов C. neoformans разной вирулентности на продукцию факторов микробоцидности перитонеальными макрофагами
- 5.2.2 Влияние штаммов C. neoformans разной вирулентности на способность макрофагов продуцировать нитроксидные радикалы in vitro
- Режимы культивирования при получении дрожжевой биомассы с высоким содержанием селена
- Исследование in vitro биосовместимости матриксов на основе гибридной золь-гель-полимерной системы, содержащей Zr, полученных методом двухфотонной фотополимеризации
- ГЛАВА 27.3 Первичная перитонеальная карцинома (Первичный перитонеальный рак) (С48.1, С48.2, С48.8)
- Эпидемиология перитонеального канцероматоза
- Первичная перитонеальная карцинома (Первичный перитонеальный рак) (С48.1, С48.2, С48.8)
- Макрофаги
- Макрофаги.
- 3.2.8 Определение уровня продукции цитокинов макрофагами
- 1. Макрофаги и моноциты.
- 3.2.6 Определение фагоцитарной активности макрофагов
- Полиморфизм генов, предрасполагающих к развитию тромбофилии, у пациенток с трубно-перитонеальным бесплодием