Сравнительное изучение времени жизни в плазме крови крысы пептидов TGENHR и TGeNHR-NH2

Для анализа биотрансформации пептидов TGENHR и TGENHR-NH₂ использовалась ВЭЖХ продуктов взаимодействия [³H]TGENHR и [³H]TGENHR-NH₂ с гепариновой плазмой крови и мембранами клеток головного мозга крысы.

Рис. 2. Биодеградация пептида TGENHR-NH₂ в плазме крови крысы за 10 мин Радиохроматография в градиенте метанола (0-30%) 0.08% TFA и 0.02% HFBA на колонке Крома- сил С18: 4 - пептид HR-NH₂,6 - пептид ENHR-NH₂, 8 - пептид TGENHR-NH₂

Рис. 3. Биодеградация пептида TGENHR-NH₂ в плазме крови крысы за 60 мин Радиохроматография в градиенте метанола (0-30%), 0.08% TFA и 0,02% HFBA на колонке Крома- сил С18: 6 - пептид HR-NH₂, 8 - пептид ENHR-NH₂, 9 - пептид TGENHR-NH₂

Рис.

Рис. 5. Биодеградация пептида TGENHR в плазме крови крысы за 7 мин

Радиохроматография в градиенте метанола (0-30%), 0,08% TFA и 0,02% HFBA на колонке Кро- масил С18: 4 - пептид HR, 6 - пептид TGENHR

В результате проведенных исследований было найдено, что пептид TGENHR- NH₂ обладает высокой устойчивостью к гидролизу в плазме крови. Период его полудеградации составляет 21 минуту, что в несколько раз больше, чем в случае пептидаTGENHR, не имеющего амидной защиты С-конца пептидной цепи. Период

Рис. 6. Кинетика биодеградации пептида TGENHR-NH₂ в плазме крови крысы

Рис. 7. Кинетика биодеградации пептида TGENHR в плазме крови крысы

полудеградации пептида TGENHR составляет 2 минуты, что находится на уровне пептидов Семакс и Селанк, также обладающих нейропротекторными свойствами (Золотарев и др., 2006) (рис. 6, 7)

Гидролиз пептида TGENHR-NH₂ происходит с N-конца пептидной цепи и основной вклад в его гидролиз в плазме крови вносят диаминопептидазы. Основные продукты гидролиза тетрапептид - ENHR-NH₂ и дипептид HR-NH₂. Гидролиз пептида TGENHR происходит с N-конца пептидной цепи и основной вклад в его гидролиз в плазме крови вносят дикарборксипептидазы. Основные продукты гидролиза - тетрапептид TGEN и дипептид HR. Также было обнаружено, что в буфе-

Рис. 8. Биодеградация пептида TGENHR-NH₂ на мембранах клеток мозга, 90 мин. Радиохроматография в градиенте метанола (0-30%) 0,08% TFA и 0,02% HFBA на колонке Кромасил С18: 6 - пептид HR-NH₂, 9 - пептид TGEnHr-NH₂

ре, используемом для радиолигандного анализа, пептиды обнаруживают высокую стабильность при взаимодействии с мембранами клеток головного мозга крысы (рис. 8). После взаимодействия пептида с мембранным препаратом в течение 90 минут при 37°С сохраняется более 80% меченного тритием пептида [³H]TGENHR- NH₂. Таким образом, было показано, что эти условия могут быть использованы при выборе параметров радиолигандного связывания. Был поведен анализ нейропротекторной активности пептидов ENHR-NH₂ и дипептида HR-NH₂, показавший, что пептид HR-NH₂ является активным метаболитом, обладающим высокой ноотроп- ной активностью, соизмеримой с активностью пептида TGeNHR-NH₂.

4.