Поиск первичной мишени пептида TGeNHR-NH2 и ex vivo анализ изменения рецепторных характеристик мозга при его введении
Ранее в многочисленных экспериментах было показано, что пептид HLDF-6 обладает высокой ноотропной и нейропротекторной активностью, однако механизм психо- и нейротропного действия данного пептида остается, в основном, нераскрытым.
В связи с этим была изучена роль рецепторов, предположительно контролирующих уровень исследовательской активности и тревожности. Был проведен поиск предполагаемых мест специфического связывания пептида TGeNHR-NH2 и исследовано изменение рецепторных параметров мозга при его субхроническом системном введении. Специфическое связывание пептида исследовали методом радиолигандного анализа in vitro на мембранах мозга крысы с использованием меченного тритием пептида [3H]TGENHR-NH2, а влияние субхронического системного введения пептида TGENHR-NH2 исследовали методом ex vivo анализа изменения плотности глутаматных, никотиновых и серотониновых рецепторов на мембранах префронтальной коры и гиппокампа мозга мышей инбредных линий C57Bl/6 и Balb/c, применяя меченные тритием селективные лиганды к этим рецепторам.В экспериментах по поиску предполагаемых мест специфического связывания пептида HLDF-6 за основу был взят метод, описанный в работе (Долотов и др., 2003), посвященной поиску специфических мест связывания для пептида Семакс в модификациях. Крыс линии Вистар (самцы) декапитировали, извлеченный мозг промывали и гомогенизировали в 10 объемах 10 мМ Трис-HCl буфера, рН=7,4, содержащего 0,32 М сахарозу, 1 мМЭДТА, 1 мМ бензамидин и 0,1 мМ фенилметил- сульфонилфторид (буфер 1). Гомогенизацию и все последующие операции проводили при температуре 40°C. Гомогенат центрифугировали в течение 20 мин при 1000 g, и супернатант подвергали повторному центрифугированию при 40 000 g в течение 30 мин. Плотный коричневый осадок на дне пробирки, обогащенный митохондриями, отбрасывали, а менее плотный светлый осадок суспендировали в буфере 1, переносили в чистую пробирку и дважды промывали этим буфером, осаждая мембраны центрифугированием, аналогичным предыдущему. По окончании промывок осадок суспендировали в 10 мМ Трис-HCl, рН=7,4, содержащем 0,22 М сахарозу и 1 мг/мл БСА, и хранили в жидком азоте. Концентрация белка для хранения, определенная по модифицированному методу Лоури, составляла 5-10 мг/мл.
Исследуемый пептид TGeNHR-NH2 в диапазоне концентраций от 10-4 до 10-9М не обнаружил эффекта конкуренции с меченным [3H]TGENHR-NH2 за предполагаемые рецепторные места связывания как при времени инкубации - 15 минут, так и при инкубации в течение 60 минут. Вариации рН среды инкубации (6.5, 7.4 и 8.0) также не способствовали выявлению специфического связывания лиганда на мембранах. В этом году получен только небольшой объем предварительных данных, которые необходимо существенно дополнить, для того чтобы прийти к определенным выводам о первичной мишени гептапептида TGENHR-NH2 на мембранах головного мозга.
5.
Еще по теме Поиск первичной мишени пептида TGeNHR-NH2 и ex vivo анализ изменения рецепторных характеристик мозга при его введении:
- Влияние субхронического системного введения пептида TGeNHR-NH2 на характеристики рецепторного связывания на мембранах мозга мышей линий C57Bl/6 и Balb/c методом ex vivo анализа
- Изучение влияния субхронического системного введения пептидов TGENHr-NH2, ENHR-NH2 и HR-NH2 на эффективность исследовательского поведения мышей линий C57Bl/6 и Balb/c
- Сравнительное изучение времени жизни в плазме крови крысы пептидов TGENHR и TGeNHR-NH2
- Поиск доклинических немоторных маркеров паркинсонизма при изучении характеристик сна
- Изменение содержания сульфатидов в структурах мозга при развитии БА
- НЕЙРОТРОФИЧЕСКИЙ ПЕПТИД ИЗ ПОВРЕЖДЕННОГО МОЗГА
- Роль предшественника амилоидного пептида и его метаболитов в патогенезе болезни Альцгеймера
- Исследование фармакокинетики и фармакодинамики амидной формы нейропротекторного пептида HLDF-6 с использованием равномерно меченных изотопами водорода соединений
- Опыты с однократным введением антагонистов NMDA-рецепторного комплекса
- 3. 4. 4. Анализ МРТ – исследования головы при опухолях головного мозга
- 3. 4. 3. Анализ МРТ – иследования головного и спинного мозга при рассеянном склерозе
- Характеристика токсичности и биологического действия фуллеренов in vivo
- 3. 1. 3. Совокупный анализ патологических рефлексов области лица при сосудистых заболеваниях головного мозга
- НАТРИЙУРЕТИЧЕСКИЙ ПЕПТИД МОЗГА [1-32] (Brain Natriuretic Peptide (BNP-32)
- Анализ изменений колебаний периферического кровотока при проведении холодовой прессорной пробы
- Комбинированный спектроскопический анализ нервных тканей по спектрам флуоресценции и диффузного отражения in vivo