Определение хемилюминесценции плазмы крови и гомогенатов тонкой кишки и печени

Интенсивность свободнорадикального окисления определяли методом хемилюминесценции с помощью анализатора «Флюорат-02-АБЛФ-Т». Регистрировали амплитуду максимального свечения (I_max), светосумму (S) в относительных единицах [24].

Метод хемилюминесценции (ХЛ) обладает высокой чувствительностью, с его помощью можно определять короткоживущие нестабильные радикалы, которые другими способами не регистрируются.

Исследование хемилюминесценции плазмы крови. Гепаринизированную кровь центрифугировали при 1500g в течение 15 мин. Отбирали 0,5 мл приготовленной плазмы крови и разводили ее в 20 мл фосфатного буфера (состав буфера: 2,72 г KH2PO4; 7,82 г KCL; 1 г цитрата натрия C6HgO7Na3^x5,5H2O на 1 литр дистиллированной воды). Величину рН полученного раствора доводили до 7,45 титрованием насыщенным раствором КОН (фосфатный буфер+цитрат натрия). Помещали в кюветную камеру прибора. Программа «ПЛАЗМА» («перемешивание быстро», время измерения 5 мин). Свечение индуцировали добавлением 1 мл 50 мМ раствора FeSO47H2O, ускоряющего процессы перекисного окисления липидов. Интенсивность хемилюминесценции характеризует способность липидов крови подвергаться перекисному окислению.

Исследование хемилюминесценции гомогенатов внутренних органов. Навеску (1 г) внутренних органов (тонкого отдела кишечника, печени) гомогенизировали в 5 мл фосфатного буфера. Содержание белка доводили до 1 мг/мл дальнейшим разведением гомогената. Отбирали 20 мл полученного раствора и помещали в кюветную камеру прибора. Программа «перемешивание быстро», время измерения 10 мин. Свечение индуцировали добавлением 1 мл 50 мМ раствора FeSO47H2O, ускоряющего процессы перекисного окисления липидов. Интенсивность хемилюминесценции характеризует способность липидов гомогената тканей органа подвергаться перекисному окислению.

Исследования выполнены в лаборатории кафедры патологической физиологии с курсом клинической патофизиологии Омской государственной медицинской академии (зав. кафедрой - засл. деятель науки РФ, профессор В.Т. Долгих).

2.5