Определение размеров клеток бактерий
У шаровидных бактерии измеряют диаметр, у других форм — длину и ширину. Необходимо измерить 20-30 клеток, указать средние размеры и пределы колебаний. Можно определять размеры у окрашенных бактерий, но более точные данные получаются при измерении живых клеток, например при фазово-контрастной микроскопии.
Если клетки обладают подвижностью, то в среду добавляют 0,1% раствор агара.Для измерения используют окулярный микрометр и объективный микрометр. Окуляр-микрометр — это круглая стеклянная пластинка, в центре которой есть линейка длиной 5 мм, разделенная на 50 частей. При работе вывинчивают глазную линзу в окуляре, на диафрагму делениями вниз кладут окуляр-микрометр и снова собирают окуляр. Объект-микрометр — металлическая пластина с отверстием, в которое вставлено стекло с линейкой размером в 1 мм, которая разделена на 100 частей, т.е. одно деление равно 10 мкм.
Для определения цены деления окуляр-микрометра объект-микрометр кладут на предметный столик и совмещают шкалу окуляр-микрометра и объект-микрометра, т.е. первые черты делений шкал. Затем определяют, сколько в делениях объект-микрометра вмещается делений окулярного микрометра. Например, в трех делениях объект-микрометра вместилось 14 делений окуляр-микрометра, следовательно, одно деление окуляр-микрометра составляет 30 мкм: 14 = 2,14 мкм. Можно при этом пользоваться формулой:
0,01 - а/в = с, где
а — количество делений объект-микрометра, совпадающих с делением окулярного микрометра;
в — количество делений окулярного микрометра, совпадающих с делением объект-микрометра;
с — величина одного деления окулярного микрометра.
После калибровки окуляр-микрометра на предметный столик помещают препарат и определяют размеры бактериальных клеток. Например, палочковидная клетка занимает в длину 2 деления, а в ширину — 0,5 деления окуляр-микрометра. Если в нашем случае 1 деление окуляр-микрометра составляет 2,14 мкм, то размеры клетки будут: длина — 2,14х2 = 4,28 мкм, ширина — 2,14х0,5 = 1,07 мкм.
В работе удобен винтовой окулярный микрометр МОВ-1—15, который закрепляют на тубусе вместо окуляра. В окуляре винтового микроскопа вмонтирована неподвижная шкала с ценой деления 1 мм и подвижная стеклянная пластинка с перекрестием. Она связана с микрометрическим винтом-барабаном и перемещается при его вращении. Цену деления барабана для каждого объектива определяют при помощи объект-микрометра: перекрестие подводят к началу одного деления объект-микрометра и отмечают деление на барабане. Далее вращают барабан, перемещая перекрестие до конца деления объект-микрометра, и вновь определяют деление на барабане. Вычисляют, скольким делениям микрометрического винта-барабана соответствует одно деление объект-микрометра. Например, 1 деление объект-микрометра, равное 10 мкм, соответствует X делениям микрометрического винта-барабана, следовательно, 1 его деление при данном увеличении микроскопа составляет 10:X мкм. При измерении длины микробной клетки вращением микрометрического винта-барабана перекрестие подводят к концу клетки и отмечают деление на барабане. Затем перекрестие подводят к другому концу клетки и снова отмечают деление на барабане. Определяют, скольким делениям микрометрического винта-барабана соответствует длина клетки, и умножают полученное число на цену деления барабана при данном увеличении микроскопа.