Негативное окрашивание бактерий

При данном способе окрашивают тем или иным методом среду, в которой заключены неокрашенные бактериальные краски. Метод позволяет выявлять клетки и структуры, которые плохо воспринимают красители, например спирохеты, внеклеточную слизь.

Обычно для негативного окрашивания используют тушь, 10%-ный водный раствор нигрозина, 2%-ный водный раствор конго красного. Окрашивание можно проводить в двух вариантах:

а) на край стекла наносят каплю красителя и каплю бактериальной взвеси, перемешивают и готовят мазок как из крови, в котором всегда можно найти участок с оптимальной плотностью красителя;

б) раствор красителя наносят тонким слоем на сухой фиксированный мазок и выдерживают до высыхания краски.

Тушь берут концентрированную, и в ней должны присутствовать крупные частицы. При окрашивании конго красным высушенные мазки помещают в 1%-ный раствор HCl в этаноле, что обеспечивает образование темно-синего фона. Негативное окрашивание можно комбинировать с позитивным. Например, мазки с конго красным высушивают и, не фиксируя, докрашивают 1-2 минуты в кислом фуксине, при этом фон препарата становится синим.

Кислый фуксин по Мейнвалу: водный раствор фенола (5%-ный) — 30 мл, ледяная уксусная кислота, разбавленная дистиллированной водой 1:5 — 8-10 мл, 30%-ный водный раствор хлорного железа — 4 мл, 1%-ный водный раствор кислого фуксина – 1-2 г.

Приготовление туши: к 1 г черной туши прибавляют 3 объема дистиллированной воды, центрифугируют при 2000-3000 об/мин в течение 15-20 минут, сливают надосадочный слой туши и стерилизуют при 0,5 атм в течение 10 минут.