Определение общей антиоксидантной ёмкости сыворотки крови

Принцип метода основан на подавлении антиоксидантами сыворотки крови хемилюминесценции, регистрируемой в модельной системе 2,2- азобис(2-аминопропан)-дигидрохлорид (АВАР) - люминол.

Оборудование: хемилюминометр SmartLum-5773 (ООО

«Интероптика», Москва) с программным обеспечением PowerGraph 3.3, набор кювет из полистирола, микродозаторы, лабораторная посуда.

Ход определения: в кювету помещают 960 мкл трис - буфера, 20 мкл люминола и 20 мкл АВАР в последнюю очередь - субстрат. Измерения проводят при +37 ⁰ С, со скоростью перемешивания 20 об/мин. На дисплее визуализируется кривая хемилюминесценции. Когда кривая достигает плато, что говорит о равновесном состоянии системы АВАР - люминол, в кювету вносят 20 мкл образца. Измерение заканчивается, когда кривая после добавления сыворотки снова выходит на плато, что является показателем отсутствия антиоксидантов в регистрируемой системе. По такому же принципу проводили калибровочное измерение со стандартным антиоксидантом - аскорбиновой кислотой в физиологических концентрациях. На полученных кривых определяли латентные периоды хемилюминесценции двух фаз измерения т₀ (без образца) и ті (с образцом). Общую антиоксидантную активность сыворотки (ОААС) определяли по формуле в пересчете на сыворотку:

ОААС =

^ті ~ +)

^А “ ^т0А

где тО - латентный период хемилюминесценции реакционной системы без образца;

ті - латентный период хемилюминесценции реакционной системы после добавления образца;

тА - латентный период хемилюминесценции реакционной системы с аскорбиновой кислотой;

тОА - латентный период хемилюминесценции в калибровочной системе.

Общую антиоксидантную активность сыворотки определяет совокупность механизмов антирадикальной защиты, включающая активность как низкомолекулярных, так и ферментативных антиоксидатнов, что

отражает способность данных систем противодействовать эффектам пероксидации в условиях интенсивного оксидативного стресса. Данный показатель выражали в относительных единицах.

2.4.7.