Методы бактериологическогой диагностики
В ходе исследований также проводилась бактериологическая диагностика, которая основана на выделении хламидий из исследуемого материала путем заражения первичных или перевиваемых клеточных культур (Баткаев Э.А., Липова Е.В., 2004).
Для выделения хламидий клетки линии L-929 выращивали на покровных стеклах, помещенных в плоскодонные пробирки. Посевная доза клеток – 100 тыс. кл./мл среды. В питательную среду 199 Хенкса добавляли 5% сыворотки крупного рогатого скота. Через 24 часа культивирования клетки должны давать рост в виде монослоя. До инокуляции инфекционного материала клеточный монослой обрабатывался ДЕАЕ-декстраном (30 мкг/мл.) в течение 30 мин.
После инокуляции исследуемого материала на монослой культуральных клеток (по 0,2 мл в 2 плоскодонные пробирки со стеклами, покрытыми клеточным монослоем) применялся метод принудительной адсорбции – центрифугирование при 3000 об./мин. в течение часа. После центрифугирования неадсорбированный материал удаляли, клетки промывали культуральной средой без сыворотки. Затем клетки помещали в питательную среду с добавлением 5% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота, 5% 0,5 М раствора глюкозы и с антибиотиком циклогексимидом (0,5-1,0 мкг/мл), подавляющим синтетическую активность клетки-хозяина, дальнейшее культивирование проводили в течение 48-72 часов при температуре 35,50 С.
Оценку результатов производили через 48-72 часа методом непрямой иммунофлуоресценции (НИФ), с использованием специфических моноклональных антител, меченных флуоресцеином, а также при окраске 1 стекла по Май-Грюнвальд-Гимза (Бочкарев Е.Г., 2000, 2005). При получении отрицательных результатов производился новый посев (пассаж) материала.
При исследовании препаратов инфицированных клеточных культур хламидии выявлялись в виде характерных цитоплазматических включений, окрашенных в соответствующий методу цвет. Выявление хотя бы одного цитоплазматического включения, имеющего специфическое окрашивание, форму и структуру было достаточно для констатации факта хламидийной инфекции в исследуемом объекте.
Еще по теме Методы бактериологическогой диагностики:
- 2.4. Лучевые методы диагностики
- Методы дородовой диагностики
- Лучевые методы диагностики
- Анализ методов неинвазивной диагностики кровообращения глазного яблока
- Традиционные методы электрокардиографической функциональной диагностики
- Метод диагностики микроциркуляторных нарушений при ревматических заболеваниях
- Методы диагностики и лечения верхнечелюстного синусита.
- 34. Методы диагностики способностей.
- Методы лабораторной диагностики заболеваний, ассоциированных с микоплазменной инфекцией
- Серологические методы диагностики хламидий
- Лабораторные методы диагностики.
- Дополнительные методы лучевой диагностики заболеваний молочной железы
- 112. Методы диагностики герпетических кератитов
- Применение инструментальных методов для диагностики паразитозов
- 34. Методы диагностики функциональных состояний субъекта труда.
- Методы диагностики общения
- Молекулярно – биологические методы диагностики папилломавирусной инфекции.
- Диагностика заболевания или состояния (группы заболеваний или состояний), медицинские показания и противопоказания к применению методов диагностики.
- Лучевые методы исследований в диагностике костных метастазов
- Методы диагностики