3.2. Изучение местного клеточного иммунитета аденоидных вегетаций и небных миндалин у часто болеющих детей

Показателями функционального состояния клеточного иммунитета in situ явилось изучение общей популяции Т-лимфоцитов (СЭЗ+клеток), субпопуляций Т-лимфоцитов - Т-хелперов ( СО4+клеток) и Т- цитотоксических клеток (CD8+ клеток ), а также КІ67+ и bcl-2+ клеток.

Иммуногистохимически СОЗ+клетки локализовались в межфолликулярных зонах в ткани аденоидных вегетаций и небных миндалин (рис.4,5).

Рис. 4

СВЗ+клетки в ткани аденоидных вегетаций у ЧБД, ув.40.

Рис.5

CD3+ клетки при хронических аденоидитах у ЧБД, ув. 100.

Лимфоидные фолликулы, как правило, были интактными по отношению к этому маркеру. Однако, в нескольких случаях гиперплазированные лимфоидные фолликулы включали в себя единичные DAB-позитивные клетки (рис.7). Их распределение было неравномерным, как по клеточной плотности, так и по участкам гистологического среза На некоторых из них СОЗ+клетки обнаруживали тенденцию к очаговому скоплению, преимущественно вокруг микрососудов. Воспалительный инфильтрат включал в себя DAB-позитивные клеточные элементы. Практически во всех случаях в ткани аденоидных вегетаций и небных миндалин эти клетки обнаруживались в составе многослойною плоского и призматического эпителия (рис.52). Это явление лимфоэпителиального симбиоза более подробно описывается в 3.5 разделе настоящей главы. Их плотность была достаточно вариабельна и сводилась к минимуму в случаях декомпенсированных форм воспаления, когда эпителиальный покров метаплазировался, истончался, подвергался десквамации, а под эпителием разрасталась фиброзная ткань.

Необходимо подчеркнуть следующее обстоятельство. Морфология и иммуноморфология ткани аденоидных вегетаций и небных миндалин практически не отличались друг от друга, подчеркивая тем самым их единый гистогенез и функциональную организацию.

Эти явления хорошо видны при сравнении контрольных препаратов интактной миндалины ( рис.6 ) с вышеописанными.

СОЗ+клетки в интактной миндалине, СВЗ+клетки (DAB-позитивные) ув.60 при аденоидитах у ЧБД, ув. 400

Как видно, при отсутствии воспалительного процесса распределение клеток ноет более равномерный характер, не зависит от топоірафии «сосудов, отсутствует тенденция к очаговости, их плотность

значительно меньше. Лимфоидные фолликулы, межфолликулярные зоны и эпителий не изменены. Т.е. данный вид клеток в условиях ненарушенной гистоархитектоники ткани принимает участие в формировании обычного иммунного статуса in situ.

С целью изучения связи клинических данных с иммуногистохимическими параметрами вес больные дети были разделены на следующие группы по клиническим и анамнестическим данным.

По длительности заболевания пациенты была разделена на 3 группы, представленные в табл.2 (см. выше).

По клиническим диагнозам пациенты были распределены на группы представленные в табл. 3.

Таблица 3

Распределение ЧБД по клиническим диагнозам.

По степени гипертрофии аденоидных вегетаций выделены группы больных, представленные в табл.

Таблица 4

Распределение ЧБД по степени гипертрофии аденоидных вегетаций.

По имуногистохимическим параметрам, а именно - по плотности (D) СОЗ+клеток в поле зрения при ув.400, все обследованные больные были разделены на 3 группы ( табл.5).

Таблица 5

Распределение ЧБД в зависимости от плотности (D) СОЗ+клеток в ткани аденоидных вегетаций и небных

Количество

больных

Процент

35,8%

1 группа,

D - от 50 до 70 клеток в п/з

С использованием вышеописанных методов биологической статистики, мы изучили силу связи и се достоверность между клинико-анамнестическими данными и ИГХ-параметрами, в данном случае - с количеством СОЗ+клеток. Оценка связи между клинико-анамнестическими данными, отраженными в табл. 1, 2 и 3 с одной стороны и данными табл.4 - с другой стороны, не выявила достоверной связи между исследованными показателями (Р>0,05). Тем не менее, некоторые сочетания представляются достаточно

|оСРЗ+ 1гр. ? CD3* 2 гр. ВСРЗ+Здх

.сети

Рис.8. Зависимость плотности СОЗ+клеток у ЧБД от длительнс заболевания.

На рис.8 представлена зависимость плотности СОЗ+клеток от длительности заболевания. Видно, что несмотря на недостоверность сопряженности изученных признаков (Р>0,05), тем не менее, определяется интересная тенденция. Речь идет о полном отсутствии 1 группы СЭЗ+клсток у пациентов с длительностью заболевания до 2 лет и наличии этих клеток в 44,4% случаев при длительности свыше 5 лет.

Проценты

степень ІШІ степень III степень

). ? CD3+ 2 гр. И CD3+ 3 Гр. I

Рис.9. Зависимость плотности СОЗ+клеток от степени аденоидных вегетаций у ЧБД.

А на рис.9 отражена зависимость плотности СОЗ+клеток в зависимости от степени аденоидных вегетаций у ЧБД. Обращает на себя внимание то обстоятельство, что, несмотря на недостоверность связи, тем не менее, у пациентов с III степенью аденоидных вегетаций СОЗ+клетки из 2 группы не встречались вообще, а из 3 группы встречались в 75% случаев.

также как и общая популяция Т-лимфоцитов, локализовались в лярных зонах ( рис. 10, 11 ).

Рис. 10

CD 4+клетки при аденоидитах У ЧБД, ув. 100.

Рис. 11

CD4+ioieTKH в ткани аденоидов у ЧБД, ув. 40

Рис. 13

СО4+клетки (DAB-позитивн при аденоидитах у ЧБД. ув

В отличие от контрольных препаратов иігтактиой миндалины (рис. 12), отмечалась неравномерность распределения этого вида клеток с тенденцией к очаговости (рис. 13). Клетки располагались, в основном, периваскулярно, клеточная плотность была намного ниже, по сравнению с общей популяцией Т-лимфоцитов. Лимфовдные фолликулы были интактны и ни в одном исследованном случае не включали в себя этот тип клеток. Также необходимо отметить, что никаких различий в топографии и характере иммуногистохимической реакции не было между тканью аденоидных вегетаций и небными миндалинами. Зона эпителиальной выстилки в некоторых случаях ( см. раздел 3.5 ) включала в себя DAB-позитивные клетки (лимфоэпителиальный симбиоз), причем их количество зависело от состояния эпителия. В случае десквамации, метаплазии и разрастания под ним фиброзной ткани количество этих клеток существенно уменьшалось. Плотность ( D) СО4+клеток в поле зрения при ув. 400 варьировала от 20 до 100 и выше.

В зависимости от клеточной плотности, все исследованные больные также были также разделены на 3 группы ( табл.

Таблица б

Распределение ЧБД в зависимости от плотности (D) CD4+ клеток в ткани аденоидных вегетаций и небных миндалин.

Анализ сопряженности клинико-анамнестических данных и показателей СО4+клеток также не выявил достоверных взаимосвязей. Однако, некоторые данные достаточно интересны. В частности, на рис. 14 показана зависимость плотности С D4+клеток от длительности заболевания. Видно, что несмотря на недостоверные связи (Р>0,05), CD4+ клетки из 1 группы возрастают с 40% случаев с длительностью заболевания до 2 лет до 87,5% случаев с длительностью заболевания свыше 5 лет, а у тех и других пациентах полностью отсутствовали Сй4+клетки из 3 группы.

до 2 лет

2-5 лет

? CD4+ 1 гр. ? CD4+ 2 rp. ta CD

Рис. 14. Зависимость плотности CD4+ заболевания у ЧБД.

На рис. 15 представлена зависимость только тонзиллита или сочетания Видно, что у больных с хроническим СВ4+клетки из 1 группы, а из 3 инфильтрация этими кл представлена в минимальн

гости

+клеток от наличия аденоидитом (Р>0,05). в 75% случаев имеются клетки отсутствуют вообще, т.е. ых миндалин при воспалении

Проценты

CD4* 1 гр. CD4* 2 ф. CD4+ 3 ф.

? тонзиллиты ? тонзиллиты+аденоидиты Распределение плотности СО4+клеток в зависимости

от диагноза хронического тонзиллита или сочетания хронического тонзиллита с аденоидитом..

CD8+ цитотоксические лимфоциты на всех изученных неравномерно распределены в межфолликулярных зонах, тенденция к очаговому скоплению клеток, в т.ч.

Рис.16

СО8+клетки в ткани аденоидов у ЧБД, ув. 100

Рис. 17

СО8+КЛЄТКИ в межфолликулярных зонах аденоидов у ЧБД, ув. 40

В то время как эпителий лимфоидных органов глотки, как правило, включат эти клетки (рис.53, 54), формируя феномен лимфоэпителиального симбиоза. Клеточная плотность в этом случае также варьировала довольно в широких пределах. Отметим, что МАТ этой серии отличало очень высокое качество визуализации DAB-позигивных клеточных структур (рис. 18). Хорошо

клеточная мембрана тестируемых клеток.

Рис. 18

Рис. 19

CD8+ клегки в аденоидных вегетациях у ЧБД, ув.400

СЭ8+клетки в интактной миндалине

ув.60

Отмечается, свойственная и другим Т-лимфоцитам, закономерность, заключающаяся в том, что интенсивность клеточной реакции была обратно пропорциональна степени разрастания фиброзной ткани. В случаях длительного воспалительного процесса, декомпенсированных форм хронического тонзиллита и аденоидита степень клеточной Т- лимфоцитарной реакции была минимальной по сравнению с другими формами воспаления лимфоидной ткани глоточного кольца Причем эта реакция сопровождалась более «хаотичной» топографией всех типов Т- лимфоцитов.

Препарат контрольной (интактной) ткани небной миндалины представлены на рис. 19. Видно, что локализация этих клеток - преимущественно в мжфолпикуоярных зонах и маїггийной зоне лимфоидного фолликула Плотность ниже, по сравнению с случаями с воспалительным процессом. При ненарушенной гистоструктуре ткани наличие CD8+ клеток является свидетельством их участия в обычном иммунном гомеостазе in situ.

Клеточная плотность - D варьировала от 30 до 150 клеток в п\з при ув.

Также как и другие варианты Т-лимфоцитов СО8+клетки были зависимости от плотности на 3 группы ( табл.7).

Таблица

Распределение ЧБД в зависимости от плотности (D) СО8+клеток в ткани

аденоидных вегетаций и небных миндалин.

1 группа D - от 30 до 50 клеток в п\з

2 группа 3 группа

50 до 80 I ] 3 - от 80 и выше

D - от 50 клеток

13

клеток в п\з

28,2%

Количество

больных

Процент

CD8* 1 rp. CD8+ 2 fp. CD8+ 3 гр.

? тонзиллиты ? тонзиллиты ♦ а де но идиты

И в этих случаях была анамнестическими данными и рис.20 представлена

между клинико- СО8+клеток. На СО8+клеток от степени

.20. Распределение СО8+клеток в зависимости от степени распространенности воспалительного процесса.

Видно, что у пациентов с хроническим тонзиллитом в присутствуют СР8+клетки 1 группы и у этих же пацие отсутствуют CD8+ клетки 3 группы. Т.е. инфильтрация воспалении небных миндалин представлена в минимш как и СРД+клетками (см. рис. 15).

У////,

Пропс ип.і

I степень

? CD8+ 1 гр. Рис.21. Распределен аденоидн

іеток в зависимости от степени У ЧБД.

На рис пациентов

СО8+клетки 2 Однако, представл характер. Достовср

єна интересная тенденция. Видно, что у еноидных вегетаций полностью отсутствуют же клетки из 1 и 3 группы разделены поровну, е на рис.20,21 тенденции носили недостоверный ность связи была определена в единственном случае,

ном, в табл.8. В ней представлены данные взаимосвязей количества к, разбитых по 3 группам, как указано выше, и наличием или отсутствием эозинофилов на препаратах этих же больных. Видно, что во 2 группе СР8+клеток ( 50-80 клеток в п/з, при ув.400 ) определяется верные различия по наличию эозинофилов в препаратах. Если наличие лов определялось в 14,3% случаев, то их отсутствие определялось в

46,2% случаев, Р0,05), тем не менее, прослеживается тенденция к существенному снижению Кі67+клеток у пациентов с III степенью аденоидных вегетаций по сравнению с пациентами с II степенью аденоидных вегетаций ( 66,7% против

эпителии. Плотность позитивных клеток в межфолликулярных зонах

Рис.25

Bcl-2+клетки при хронических аденоидитах у ЧБД, ув. 100

Морфология этих клеток была разнообразной, включавшей в себя мононуклсарныс клетки , плазмоциты и макрофагоподобные клетки (рис.27). Иіггенсивность цветной DAB- реакции также варьировала от

Рис.27

Морфология bcl-2-позитивных клеток в аденоидах у ЧБД, ув.400

Экспрессия bel-2- АГ на любых клетках является показателем ингибиции процесса апоптоза. В условиях хронического воспаления различной длительности вариация этого показателя является свидетельством сдвига физиологического равновесия между генетической запрограммированной клеток и процессами пролиферации ( экспрессия Кі67-антигсна).

3.3.