Определение провоспалительных факторов.
С-реактивный белок. Количественное определение СРВ производили с использованием стандартных тест-систем фирмы «Thermo Fisher Sientific» (Финляндия) на автоматическом биохимическом анализаторе Konelab 30І.
Метод основан на иммунопреципитации, усиленной полиэтиленгликолем. Измерение светопоглощения при 340 нм было пропорционально количеству антигена (СРВ), содержащегося в растворе.Интерлейкин-6. Уровень ИЛ-6 определяли количественно иммуноферментным методом в сыворотке крови с использованием тест-системы фирмы «Monobind» (США). Антитела, специфичные к ИЛ-6, были сорбированы в ячейках планшета. ИЛ-6 исследуемых образцов, стандартов и контрольных образцов связывался с антителами в ячейках планшета. Добавляемый конъюгат биотин-моноклональные анти-ИЛ-6-антитела связывали ИЛ-6, захваченный первыми антителами. После инкубации и промывки из ячеек удалялся несвязавшийся биотиновый конъюгат, и в ячейки добавлялся конъюгат стрептавидин-пероксидаза, связывающий биотин, конъюгированный с ИЛ-6. После второй инкубации и промывки из ячеек удалялся несвязавшийся стрептавидиновый конъюгат, в ячейки добавлялся субстратный раствор, который взаимодействовал с ферментным комплексом с образованием окрашенного раствора. Интенсивность окраски, измеренная на длине волны 450 нм, была прямо пропорциональна концентрации ИЛ-6, присутствующего в образцах. Концентрация ИЛ-6 в образцах определялась по стандартной кривой.
Фактор некроза опухоли альфа. Концентрацию ФНО-а оценивали методом иммуноферментного анализа с использованием тест-системы «eBiosciens Human ELISA» (США) в сыворотке крови. В процессе анализа стандарты и исследуемые образцы инкубировались в лунках микропланшета, покрытых моноклональными антителами к ФНО-а человека. Добавляемый конъюгат биотин-моноклональные анти- ФНО-а -антитела связывали ФНО-а, захваченный первыми антителами. После инкубации и промывки из ячеек удалялся несвязавшийся биотиновый конъюгат, и в ячейки добавлялся конъюгат стрептавидин-пероксидаза, связывающий биотин, конъюгированный с ФНО-а. После второй инкубации и промывки из ячеек удалялся несвязавшийся стрептавидиновый конъюгат, и в ячейки добавлялся субстратный раствор, который взаимодействовал с ферментным комплексом с образованием окрашенного раствора. Интенсивность окраски, измеренная на длине волны 450 нм, была прямо пропорциональна концентрации ФНО-а, присутствующего в образцах, которая определялась по стандартной калибровочной кривой.
Еще по теме Определение провоспалительных факторов.:
- Провоспалительный цитокин – интерлейкин 6
- Уровень провоспалительных цитокинов в СОТК при СРК
- Провоспалительные цитокины
- 3.2.7 Методы определения факторов микробоцидности
- Определение основного фактора роста фибробластов в сыворотке крови
- Факторы риска развития пневмоний определенной этиологии
- Определение фактора некроза опухоли а, интерферона у и интерлейкина-1 р в сыворотке крови
- 1.2. Медико-санитарные последствия чрезвычайных ситуаций: определение понятия, поражающие факторы.
- Определение аутоантител к Н+/К+-АТФазе обкладочных клеток желудка и фактору Кастла
- Определение и характеристика понятий: поражающие факторы ЧС, медико-санитарные последствия ЧС, виды повреждений у пострадавших в ЧС
- Использование многомерного разведочного анализа для определения прогностической значимости клинико-морфологических факторов и полиморфизмов гена TYMS
- ПЭ: определение, классификация, частота возникновения, этиология, факторы риска, клинические проявления и осложнения
- Определение экспрессии растворимой сосудисто-клеточной адгезивной молекулы типа 1 - sVCAM-І в сыворотке крови Определени
- Обоснование выбора влияния фактора и оценки фактора
- Ангиогенные факторы роста как фактор риска развития осложнений при беременности
- Групповые факторы и S-факторы в теории интеллекта Ч. Спирмена.
- Определение уровня цитокинов
- Определение иммуноглобулинов