Определение фактора некроза опухоли а, интерферона у и интерлейкина-1 р в сыворотке крови
Регистрацию уровней ФНО-а, ИФН-у и ИЛ-1р в сыворотке крови проводили с использованием наборов реактивов «ИФА-TNF-alfa», «ИФА- IFN-gamma» и «ИФА-ИЛ-1р», разработанных ООО «Цитокин» (С.- Петербург, Россия) для количественного определения фактора некроза опухоли, интерферона у и интерлейкина 1Р человека методом твердофазного иммуноферментного анализа в соответствии с прилагаемыми инструкциями.
Принцип работы наборов «ИФА-TNF-alfa» и «ИФА-IFN-gamma»
Используются два моноклональных антитела с различной эпитопной специфичностью к указанным цитокинам.
Цитокин, содержащийся в калибровочных и исследуемых пробах, связывается с антителами, иммобилизованными на внутренней поверхности лунок (инкубация 2 часа при комнатной температуре с последующим промыванием). На второй стадии анализа иммобилизованный цитокин взаимодействует с антителами, меченными биотином (инкубация Г час при комнатной температуре с последующим промыванием). Затем добавляют стрептавидин-пероксидазу (инкубация 30 минут при комнатной температуре). Во время инкубации (в темноте 15-20 минут) с субстратной смесью происходит окрашивание раствора. Реакция останавливается добавлением стоп-реагента. Интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся меченных антител. Результаты реакции учитывали при длине волны 450 нм на спектрофотометре «Мультискан» (Венгрия).После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочной кривой рассчитывали концентрации ФНО-а и ИФН-у в определяемых образцах. Вид графиков представлен на рисунках 3.2 иЗ.З.
Рис. 3.2. Калибровочный график для определения содержания ФНО-а.
Минимальная достоверно определяемая набором концентрация ФНО-а в исследуемых образцах не превышала 1 пг/мл.
У 24 здоровых добровольцев сывороточная концентрация ФНО-а в диапазоне оптимума составила 2,8-10,5 пг/мл.
Рис. 3.3. Калибровочный график для определения концентрации ИФН- Y-
Минимальная достоверно определяемая набором концентрация ИФН-у в исследуемых образцах не превышала 20 пг/мл;
У 24 здоровых добровольцев сывороточная концентрация ИФН-у в диапазоне оптимума составила 50,0-110,0 пг/мл.
Принцип работы набора для определения ИЛ-1
Твердофазный комплекс формировался при последовательном внесении в плату соответствующих реагентов (образцы сыворотки и поликлональные антитела х ИЛ-1р), избыток которых после инкубации (по 1 часу при комнатной температуре) каждый раз удалялся аспирацией и промывкой платы. Количество связавшегося конъюгата - антитела, конъюгированные с пероксидазой (инкубация 25-30 минут при комнатной температуре), определяющего интенсивность развития окраски в каждой лунке после прибавления раствора хромогена, пропорционально количеству ИЛ-ір в исследуемом образце. Результат анализа вычисляли по
калибровочному графику после измерения оптической плотности при длине волны 450 нм (спектрофотометр «Мультискан», Венгрия) (рис. 3.4).
Рис. 3.4. Калибровочный график для определения концентрации ИЛ-ір. Используемый набор предназначен для определения ИЛ-10 в диапазоне
концентраций от 6,3 до 400,0 пг/мл.
У 24 здоровых добровольцев сывороточная концентрация ИЛ-ір в диапазоне оптимума составила 7,0-18,0 пг/мл.
3.1.
Еще по теме Определение фактора некроза опухоли а, интерферона у и интерлейкина-1 р в сыворотке крови:
- 4.1. Интерлейкин-1 р, фактор некроза опухоли а и интерферон у при недифференцированной дисплазии соединительной ткани
- Определение основного фактора роста фибробластов в сыворотке крови
- Определение экспрессии растворимой сосудисто-клеточной адгезивной молекулы типа 1 - sVCAM-І в сыворотке крови Определени
- Фактор некроза опухолей.
- Определение концентрации С-реактивного белка в сыворотке крови
- Определение общей антиоксидантной ёмкости сыворотки крови
- Методика определения содержания ацилгидроперекисей липидов в сыворотке крови
- Фактор некроза опухолей альфа
- Определение концентрации белка A-SAA и CA125 в сыворотках крови методом иммуноферментного анализа
- Твердофазный иммуноферментный анализ (enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) для определения уровня IL-10, IL -6, IL- 8, IL-1B, IFN-y, TNF-a в сыворотке крови
- Определение уровня свободных цитокинов в сыворотках/плазме крови и супернатантах МЛПК
- Содержание основного фактора роста фибробластов в сыворотке крови при недифференцированной дисплазии соединительной ткани
- Хроматографический метод определения метаболитов метанола и формальдегида в биологических средах (в сыворотке крови и моче)
- Индукция цитотоксичности и апоптоза в клеточных линиях меланом при комбинировании фактора некроза опухоли (альнорин) с противоопухолевыми препаратами
- 4.11.1 Влияние Na^SSG-инозина на динамику индукции эндогенного интерферона в периферической крови
- Исследование антител к БТШ в сыворотке крови
- Исследование уровня ПСА сыворотки крови
- Тема № 6. Некроз. Клинико-морфологические формы некроза, исходы. Апоптоз. Сравнительная характеристика некроза и апоптоза.
- Сыворотка (плазма) крови.
- Методы исследования содержания гормонов сыворотки крови