Определение аутоантител к Н+/К+-АТФазе обкладочных клеток желудка и фактору Кастла
Для выявления антител к антител к Н+/К+-АТФазе обкладочных (париетальных) клеток желудка применялся метод непрямой иммунофлуоресценции (нРИФ).
Антитела к Н+/К+-АТФазе обкладочных клеток выявляли на тройном субстрате криосрезов тканей крысы - желудок, почка и печень c использованием коммерческих наборов (Euroimmun, Германия).
Образцы сыворотки пациентов и контрольные сыворотки разводили буфером для образцов и вносились в лунки на слайды в разведении 1/40. Инкубировались во влажной камере 30 минут. Затем проводили отмывку буфером 1 раз 5 минут. После во все лунки вносили антисыворотку против иммуноглобулинов человека (IgGAM), меченных флуоресцеином вторичных антител (ФИТЦ). Инкубировали 30 минут во влажной камере и проводилиотмывку буфером с твином 1 раз 5 минут. Далее на слайд наносили монтирующую жидкость и покрывали покровным стеклом. Результат оценивали с помощью люминисцентного микроскопа EUROStar, EUROIMMUN (Германия).
Результат реакции описывался в титре (норма < 1:40, патологическое значение выше или равно 1:40). При обнаружении антител Н+/К+-АТФазе обкладочных клеток проводили определение конечного титра (рисунок 2).
Рисунок 2. Непрямая иммунофлюоресценция (нРИФ); флюоресценция
антител Н+/К+-АТФазе обкладочных клеток, разведение сыворотки 1:160, увеличение х400.
Антитела к фактору Кастла
Антитела к фактору Кастла определяли в сыворотке крови методом твердофазного иммуноферментного анализа (enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)) с помощью стандартных наборов фирмы «EUROIMMUN» (Германия). Нормальным уровнем считается показатель < 20 ОЕд /мл.
Диагностика проводилась на базе Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Минздрава России к.м.н., старшим научным
сотрудником лаборатории диагностики аутоиммунных заболеваний Т. В. Булгаковой.
2.2.6
Еще по теме Определение аутоантител к Н+/К+-АТФазе обкладочных клеток желудка и фактору Кастла:
- Определение уровня аутоантител к коллагенам I, II, III, IV и V типов в плазме крови
- 3 Методы определения соматических клеток
- Определение размеров клеток бактерий
- Механизм действия Na/K-АТФазы
- Механизм действия Са2+-АТФазы
- Методические рекомендации по определению количества микробных клеток в исследуемом материале
- 2.1 Определение общего количества микробных клеток
- Методические указания по определению соматических клеток в молоке
- 6.2. Мембранотоксическая активность неоплазмы как патогенетический фактор изменения клеток крови и опухолевого роста
- 9.1. ТРОМБОЦИТАРНЫЙ РОСТОВОЙ ФАКТОР КЛЕТОК ЭНДОТЕЛИЯ (Platelet-Derived Endothelial Cell Growth Factor, PD-ECGF)
- 3.4.1. Изменения частоты факторов у больных раком желудка и толстой кишки без учета распространенности процесса.
- Изменения частоты факторов у больных раком желудка и толстой кишки при I-II стадии распространенности процесса.
- Определение провоспалительных факторов.
- Изменения частоты факторов у больных раком желудка и толстой кишки при III-IV стадии распространенности процесса.
- 3.2.7 Методы определения факторов микробоцидности