Методы качественного и количественного определения маркеров органной (легочной) воспалительной реакции
Определение качественного и количественного содержания клеточных элементов эндопульмональных цитограмм БАЛЖ:
Цитологический метод
Взятие респираторных субстратов осуществляют в ходе выполнения санационно-диагностической фибробронхоскопии (ФБС).
Полученный биологический материал центрифугируют в течение 10 минут при 2000 об/мин. При помощи стеклянной палочки осадок БАЛЖ разделяют на порции, каждую из которых переносят на предметное стекло. Фиксацию и окрашивание мазков производят с помощью набора фиксатора и красителей «Лейкодиф 200». В состав набора входят фиксирующий раствор метанола (24 ммоль/л) 200 мл; окрашивающий раствора 1 - эозина (1,73 ммоль/л фосфатный буфер, РН 6,8, 60 ммоль/л) 200 мл; oкрашивающий раствора 2 - Азура II (12 г/л фосфатный буфер, рН 6,8, 60 ммоль/л) 200 мл.Мазок фиксируют погружением 5 раз на 1 секунду в фиксирующий раствор метанола. После каждого погружения дают возможность стечь раствору, устраняя его избыток о край сосуда. Фиксированный мазок погружают 3 раза на 1 секунду в эозин. После каждого погружения также дают возможность стечь раствору, устраняя его избыток о край сосуда. Затем мазок погружают 6 раз на 1 секунду в Азур II. Также после каждого погружения дают возможность стечь раствору, устраняя его избыток о край сосуда. Готовые мазки укладывают на специальные «рельсы» и высушивают на воздухе при комнатной температуре.
Просмотр цитологических препаратов проводят сначала под малым увеличением (10*), а затем под иммерсионной системой (100*). Мазок исследуют методом «систематического перекрестного двухразового шага», позволяющего практически без пропуска изучить каждый миллиметр площади. При изучении цитологических препаратов учитывают качественный и количественный состав клеток осадка БАЛЖ.
Определение содержания маркеров состояния альвеолярного эпителия в БАЛЖ.
Муциновый антиген 3EG5 (Ед/мл, ОП 450 нм)
Образовавшийся комплекс выявляют с помощью конъюгата мышиных моноклональных антител к альвеомуцину человека с пероксидазой хрена.
В результате образуется связанный с пластиком «сэндвич», содержащий пероксидазу. Во время инкубации с раствором субстрата ТМБ происходит окрашивание растворов в лунках, интенсивность которого прямо пропорциональна концентрации альвеомуцина в исследуемом образце БАЛЖ. Концентрацию альвеомуцина в исследуемых образцах определяют по калибровочному графику зависимости ОП от содержания альвеомуцина в калибровочных пробах.Сурфактантный белок D, SP-D (нг/мл, ОП 450 нм)
Стандарты, контроли и образцы сывороток инкубируют в лунках микропланшета, покрытых моноклональными антителами к SP-D. После инкубации в течение ночи и промывки в лунки добавляют конъюгат HRP и инкубируют 2 часа с захваченным SP-D. После второй инкубации и промывки в лунки добавляют раствор субстрата ТМБ и перекиси водорода. Энзиматическая реакция приводит к образованию голубого продукта, который становится желтым при добавлении стоп-реагента. Интенсивность окрашивания раствора прямо пропорциональна концентрации SP-D в БАЛЖ. Калибровочную кривую строят по значениям ОП, полученным для стандартов SP-D. Концентрацию в образцах определяют с помощью построенной калибровочной кривой.
3.2.
Еще по теме Методы качественного и количественного определения маркеров органной (легочной) воспалительной реакции:
- Цитологический метод диагностики органной (легочной) воспалительной реакции
- Методы количественного определения нейроспецифических белков и маркеров межклеточного матрикса
- Органная (легочная) воспалительная реакция
- Количественное определение содержания суммы флавоноидов в траве полыни эстрагон методом спектрофотометрии
- 25. Количественные и качественные характеристики социальных отклонений.
- Количественные и качественные изменения лейкоцитов в крови
- Методы определения маркеров синдрома смешанного антагонистического ответа
- Качественные и количественные нарушения фолликулогенеза в яичнике
- Качественный и количественный анализ нарушений при олигофрении (О. Некрасова).
- Метод определения фагоцитарной реакции лейкоцитов крови
- Качественный и количественный анализ МР-диффузии в злокачественных опухолях прямой кишки
- Качественный и количественный анализ МР-диффузии у пациентов с доброкачественными опухолями прямой кишки
- Влияние воспалительных реакций на патогенез сепсиса.
- Экссудат — продукт воспалительной реакции.
- Системная воспалительная реакция и сепсис у больных с ЦП и ИО
- Количественное определение суммы флавоноидов в препаратах (настое и настойке) полыни эстрагон
- Проблема послеоперационной воспалительной реакции глаза у больных катарактой
- Определение количественных показателей гемодинамики печени.
- Определение других иммуногистохимических маркеров