Получение митохондрий и определение токсичности

Суспензии митохондрий, полученных из почек, печени, сердца и легких 11 белых беспородных крыс, содержащихся в ввиварии в стандартных условиях на полноценном рационе. Митохондрии получали из гомогенатов печени, почки, легких, сердца центрифугированием в среде содержащей 250 мМ сахарозы, 5 мМ ЭДТА, 10 мМ трис-HCl буфера, рН 7,4 (среда 1) в течение 10 мин при 650 g, осадок удаляли, а из надосадочной жидкости осаждали митохондрии при 5 000 g в течение 15 мин.

В качестве быстрого высокочувствительного метода определения острой

токсичности впервые использовали метод, основанный на метаболических изменениях в препаратах митохондрий и заключающийся в регистрации отношения окисленной и восстановленной формы никотинамидадениндинуклеотида (НАДН/НАД)

спектрофотометрически [Ambrosi l., и соавт., 1990; Argese E., A. и соавт. , 1994; Blondin G.A., и соавт., 1989]. Стабильная система митохондриальных мембран различных органов является надежным биологической тест-системой, которая программированно восстанавливает экзогенный НАД в сопряженном обратимом электронном переносе или окисления НАДН в цепи переноса электронов и протона в митохондриях. При длительной экспозиции токсические металлы ингибируют один или оба редокс- потенциала активности в степени пропорциональной токсической концентрации металла. Длительность преинкубации 15 мин.

2.1.2.2.